流式细胞仪试验方法1..pdfVIP

长风破浪会有时，直挂云帆济沧海。——李白

流式细胞仪实验方法

一、实验准备

1.标本制备：

2.最小化非特异性结合：

二、凋亡

1.凋亡的检测方法：网站和其它

2.PI染色法

3.AnnexinV法

法

4.TUNNEL

三、细胞因子

1.激活的细胞因子

2.CBA

四、血小板

1.活化

2.活化检测

3.网织血小板

五、红细胞

1.网织红细胞

长风破浪会有时，直挂云帆济沧海。——李白

2.PNH

胎儿红细胞

3•

六、肿瘤学

细胞周期

1.DNA

2.蛋白

3.多药耐药

4.微小残留白血病

第一部分标本处理

一、流式细胞术常规检测时的样品制备

一直接免疫荧光标记法

（

取一定量细胞约细胞在每一管中分别加入卩的并充分混匀于

（1X106/ml,50HAB,,

室温中静置分钟以上再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应如做

1（，（

双标或多标染色可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入。孵育分钟后

，，20-60，

用—洗次加入缓冲液重悬上机检测。本方法操作简便结果准确

PBS（pH7.27.41-2,，,

易于分析适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高但减少了

，，

间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。

二间接免疫荧光标记法

（

取一定量的细胞悬液约细胞先加入特异的第一抗体待反应完全后洗