实验一_鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法.pdf

操千曲尔后晓声，观千剑尔后识器。——刘勰

鸡新城疫血凝(HA)与血凝抑制(HI）抗体水平测定法

１.本次实验得目得与要求

掌握鸡新城疫血凝（ＨA)与血凝抑制（HI）抗体水平测定法,以便检查疫苗使用效果与

制定合理免疫程序.

２.实验内容或原理

某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等）能够与动物得红细胞发生凝集，此即为红

细胞凝集现象(HＡ）。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为

红细胞凝集抑制试验（HI)。

３．需用得仪器或试剂等

动物健康成鸡2-5只,被检鸡１5—2５只。

器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙

烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0．02５mm微量吸液器、微

型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。

药剂（１)浓缩抗原;(２)生理盐水或磷酸缓冲盐水(PＢS)；(3）Alsｅver细胞保存液；(4)

红细胞悬液;（5)待检血清

4。实验步骤

（１)发现与鉴定病毒：鸡新城疫与禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡得红细胞，又能

被特异性得已知免疫血清抑制其凝集反应,即可鉴定此病毒。

(２）诊断病毒性疾病:如取同一发病得动物早期与恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验,如

抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义.

(3)免疫机体抗体效价得测定：

３、鸡新城疫(ND)得HA与HI

（1）试验准备

①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUｒａ系冻干苗作为已知抗原，进行试验。

②０、7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血,放入含有抗凝剂得灭菌试管(按每毫升血加

入３、8%灭菌柠檬酸钠０、２毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。如当时不用,可直接采血放入红

细胞保存液内（保存液2份，血液1份）于4℃冰箱内可保存两周。

红细胞悬液得配制：将血液注入离心管中,经３0０0转／分钟，离心５－10分钟,用吸管

吸去上清液与红细胞上层得白细胞薄膜，将沉淀得红细胞加稀释液(生理盐水）洗涤。再用

离心机3000转/分钟离心５—1０分钟，弃上清,再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次,将最后

一次离心后得红细胞泥,按0、7%得稀释度加入稀释液（0、7毫升红细胞泥加９9、3毫升稀

释液）。

③被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过得干燥注射器采血,注入洁净干燥试管内(微

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量法可用孔径2—3毫米塑料管由翅静脉采血），在室温中静置或离心，待血清析出后使用。

每只鸡应更换一个注射器,严禁交叉使用。

④稀释液:为灭菌得生理盐水.

⑤红细胞保存液得配制方法：葡萄糖２。05克,柠檬酸钠(SHOO)0.8０克，柠檬酸（2H0）

２

0．055克,氯化钠0.42克，蒸馏水加至100毫升。过滤分装,高压灭菌10分钟,放4℃冰箱保

存。

(2)红细胞凝集试验(HA)主要就是测定病毒得红细胞凝集价，以确定红细胞凝集抑制试验

所用病毒稀释倍数(抗原单位）。

鸡新城疫病毒得ＨA试验与HI试验现采用微量法，以u或v形微孔塑料板代替试管。

①首先用移液器向每个孔加入稀释液一滴(0、０5毫升)。

②用微量移液器取病毒抗原0、０5毫升,加入第一孔，反复抽动６次后，吸出0