超灵敏检测乳腺癌相关标志物FEN1和lncRNA的荧光生物传感器研究.pdf

目录

摘要I

AbstractIII

第一章绪论1

1.1乳腺癌生物标志物研究进展1

1.2生物传感器2

1.2.1生物传感器概述2

1.2.2光学生物传感器3

1.3Flap核酸内切酶1（FEN1）7

1.3.1FEN1概述7

1.3.2FEN1与癌症发展的关系8

1.3.3FEN1检测方法研究进展9

1.4长链非编码RNA（lncRNA）12

1.4.1lncRNA概述12

1.4.2lncRNA与癌症发展的关系13

1.4.3lncRNA检测方法研究进展14

1.5本工作的研究内容17

第二章双重信号放大的单分子荧光生物传感器用于乳腺癌相关标志物FEN1的检测19

2.1引言19

2.2实验部分20

2.2.1试剂、寡核苷酸序列及仪器20

2.2.2三元DNA探针的制备22

2.2.3FEN1分析22

2.2.4荧光光谱测量22

2.2.5单分子检测和数据处理23

2.2.6凝胶电泳分析23

2.2.7熔解曲线测定23

2.2.8SYBRGreenI/SYBRGold荧光成像24

2.2.9透射电子显微镜成像24

2.2.10抑制剂分析24

2.2.11细胞培养和细胞提取物的制备25

2.2.12乳腺癌组织提取物的制备25

2.2.13酶联免疫吸附实验25

2.3结果与讨论25

2.3.1FEN1生物传感器检测原理25

2.3.2可行性验证26

2.3.3实验条件优化29

2.3.4灵敏度测定30

2.3.5特异性分析31

2.3.6抑制剂分析32

2.3.7细胞分析33

2.3.8乳腺癌组织分析34

2.4结论35

第三章基于多重循环酶修复扩增的荧光生物传感器用于乳腺癌相关lncRNAs的检测37

3.1引言37

3.2实验部分38

3.2.1试剂、核苷酸序列及仪器38

3.2.2lncRNA分析40

3.2.3荧光光谱测量40

3.2.4凝胶电泳分析40

3.2.5熔解曲线测定41

3.2.5回收率41

3.2.6细胞培养及细胞提取41

3.2.7乳腺癌组织提取物的制备42

3.2.8qRT-PCR分析42

3.3结果与讨论42

3.3.1lncRNA生物传感器原理42

3.3.23WJ探针的特点43

3.3.3可行性验证45

3.3.4实验条件优化47

3.3.5灵敏度测定49

3.3.6特异性分析50

3.3.7回收率