高效液相色谱仪检验操作规程 .pdfVIP

⾼效液相⾊谱仪检验操作规程

⽂件内容：

1、⽬的(2)

2、范围(2)

3、职责(2)

4、正⽂(2)

5、相关⽂件与记录(5)

6、参考⽂献(5)

7、变更记载及原因(5)

发放范围：

质保处、质控处

⽂件复审：

编审批过程：

1、⽬的：

建⽴⾼效液相⾊谱仪检验操作规程，以保证其检验⼯作完成。

2、范围：

LC-20AT⾼效液相⾊谱仪。

3、职责：

3.1化验员：负责按本操作规程使⽤该设备进⾏检验。

3.2化验设备员：按时维护设备，保证设备时刻处于完好状态。

3.3质控处处长：负责本规程的审核，及设备按时校验的⼯作。

4、正⽂：

4.1泵流量准确度、流量稳定性检验

4.1.1⽤纯⽔清洗各溶剂管路，以⽔为流动相，设定流量为0.5ml/min，启动泵。

4.1.2待压⼒稳定后，在流动相出⼝处⽤事先清洗称重的50ml容量瓶收集流动相，同时⽤秒表计时。

4.1.3收集10min后，称重。同法重复三次。

4.1.4流速分别调⾄1.0ml/min和2.0ml/min，按2-3步骤操作。

4.1.5计算

Ss=(Fm-Fs)/Fs*100%

SR=（Fmax-Fmin）/Fm*100%

Fi=(w2-w1)/（ρ*t）

其中式中：

Fi=(w2-w1)/（ρ*t）—，流量实测值，mL/min

W2—容量瓶+流动相的质量，g

W1—容量瓶的质量，g

ρ—实验室温度下流动相的密度，g/cm3

t—收集流动相所⽤的时间，min

Fm—同⼀组测量的算数平均值，mL/min

Fs—流量设定值，mL/min

Fmin—同⼀组测量中流量最⼩值，mL/min

Fmax—同⼀组测量中流量最⼤值，mL/min

标准:Ss≤±2.0%Sc≤±2.0%

4.2柱温箱温度设定值误差△Ts和控温稳定性Tc的检定

4.2.1将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择25℃和45℃进⾏检定。

4.2.2按仪器SOP操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔

10min记录⼀次读数，共计7次，求出平均值。

4.2.3平均值与设定值之差为△Ts，7次读数中最⼤值与最⼩值之差为控温稳定性Tc。

标准：

△Ts（℃）≤±2℃

c

4.3紫外-可见光检测器

4.3.1波长⽰值误差的检定

4.3.1.1具体做法是：⽤⼀两通代替⾊谱柱将液路连通，以⽔做流动相，流量为1.0ml/min，

采⽤步进进样⽅法

4.3.1.2检定257nm:从252nm开始到262nm，每2min改变1nm，注⼊紫外吸收标准溶液（在

120℃⼲燥⾄恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，⽤0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释⾄1000ml）10ul

4.3.1.3这样将得到⼀组不同波长的⾊谱峰，最⾼（或最低）⾊谱峰对应的波长与标准溶液

波长之差，即为波长⽰值误差。

4.3.2基线噪声和基线漂移的检定

4.3.2.1选⽤C18⾊谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，紫外检测器的波长选在

254nm

4.3.2.2待仪器稳定后记录基线30min，检测基线噪声，⽤检测器⾃⾝的物理量（AU）作单

位表⽰。重复测定3次，计算其平均值。标准：基线噪⾳不超过5×10-4AU

4.3.2.3基线漂移⽤1h内基线偏离原点的值（AU/h）表⽰。标准：基线漂移不超过5×10-3AU

4.3.3最⼩检测浓度的检定

4.3.3.1选⽤C18⾊谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，紫外检测器的波长选在

254nm

4.3.3.2注⼊20ul浓度为1.0×10-7g/ml的萘/甲醇溶液，记录⾊谱图，由⾊谱峰⾼和基线噪声

峰-峰⾼，按式计算最⼩检测浓度cL（按20ul进样量计算）。

CL=2Nd*c*v

20H

4.3.3.3式中：CL最⼩检测浓度，g/ml；

Nd基线噪声峰-峰⾼，AU；

C标准溶液浓度，g/ml；

H标准溶液的⾊谱峰⾼，AU；

V样体积，ul。

标准：CL≤10-7g/ml

4.3.4线性范围的检定

4.3.4.1将检测器和记录仪连接好，检测器波长选在254nm，通电等待基线稳定

4.3.4.2⽤注射器直接向检测池中注射2%异丙醇/⽔溶液冲洗检测池⾄记录仪读数不变，记下此值。

4.3.4.3之后，依照上法分别注⼊丙酮/2%异丙醇系列⽔溶液（丙酮含量为0.1%，0.2%，…，1.0%）冲洗检测池，并记下各溶

液对应的稳定记录仪读数，每个溶液重复测量3次，取算数平均值。

4.3.