网站大量收购闲置独家精品文档,联系QQ:2885784924

基因工程抗体概述和基本技术.pdfVIP

  1. 1、本文档共10页,可阅读全部内容。
  2. 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  5. 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  6. 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  7. 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  8. 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多

长风破浪会有时,直挂云帆济沧海。——李白

基因工程抗体概述和基本技术

(GeneticEngineeringAntibody)

一、概述

以生物高技术为手段,将动物淋巴细胞产生的抗体基因,人为地使其在非淋巴细胞中表

达,所产生的抗体称基因工程抗体。产生抗体的基因工程是建立在单克隆抗体(McAb)技术之

上的,如果说后者是生物科学的一场革命,那么抗体的基因工程技术无疑是这场革命的拓宽

和延续。

1975年,Khler和Milstein等创立的B淋巴细胞杂交瘤技术给抗体技术的深入研究及

应用带来了突破,单克隆抗体作为临床诊断、治疗、预防及基础理论研究的新型制剂,已日

益显示出重要的作用和广阔的应用前景,尤其是McAb或“McAb复合物”对临床某些疾病如

肿瘤的治疗作用更引人注意。将McAb与化疗药物、毒素或同位素等连接后,借助McAb的特

异性识别,可有效地将治疗性药物运送到靶细胞,这种称为魔弹(magicbullets)的导向药

物疗法的出现,曾令人们兴奋不已,以为找到了攻克癌症的尖端武器。尽管这一技术有许多

不可比拟的优点,随着研究的深入,也暴露出许多问题,其中最主要的就是难以获得大批量

的人类杂交瘤抗体,致使用于临床治疗的McAb绝大多数都来源于小鼠和大鼠。由于人和鼠

之间遗传背景的差异,在人体内使用鼠源McAb,会被作为外源性蛋白抗原而产生人抗鼠抗

体(humananti-murineantibodies,HAMA),这种抗体会被迅速清除,如由静脉注入人血液

中的小鼠单抗,会妨碍小鼠McAb与抗原或靶细胞的结合,从而降低McAb的治疗效应,更为

重要的是HAMA可在人体内与小鼠McAb结合,可产生类似血清病的超敏反应,因而限制了鼠

源McAb在临床上的反复使用。最好的办法是应用人源性单抗。但人-人杂交瘤技术尚未出现

重大的突破,存在着建株困难、Ig产量太低、稳定性和亲和力差,以及本身还分泌一些杂

蛋白等问题。

基因工程抗体技术依赖于两个基础:一是抗体的结构功能关系以及抗体多样性的遗传

机制,二是分子生物学技术进展,特别是PCR技术,为基因片段的大量扩增提供了简单有效

的途径。基因工程抗体技术的基本原理是,首先从杂交瘤细胞、免疫脾细胞或外周血淋巴细

胞中提纯mRNA,逆转录为cDNA,再经PCR分别扩增抗体的重链和轻链可变区编码基因,经

适当方式将二者连接形成单链抗体可变区基因片段(single-chainvariablefragments,

ScFv),在一定的表达系统中得以表达。另外,重链和轻链可变区基因还能在同一宿主的两

个载体中分别表达,然后在胞浆内组装成单链抗体可变区片段(ScFv),或二价抗体片段。这

种单链抗体在其N末端或C末端可进一步与毒素、葡萄球菌蛋白A、碱性磷酸酶、T细胞受

体及单链抗体片段本身融合,这些蛋白质既有抗原结合能力,又有其融合蛋白的生物活性,

因此这类蛋白被称为“双功能抗体”。

二、抗体的基因结构

抗体是由二硫键相连的两条轻链(L链)和两条重链(H链)构成的活性多肽蛋白分子。具

有两个功能区:一为特异性结合抗原区,位于抗体L、H链的可变区(V区),一为稳定区(C

区)。免疫球蛋白的轻链和重链是由两个不同类型的基因分别编码的,属于多基因家族。Ig

的V基因和C基因均由多个外显子组成,Ig分子的每一个多肽区由不同的外显子编码,尤

长风破浪会有时,直挂云帆济沧海。——李白

其是重链

文档评论(0)

156****9232 + 关注
实名认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档