高致病性PRRSV诱导仔猪胸腺的损伤机制及PRRSV抗独特型抗体的免疫调控.pdfVIP

高致病性PRRSV诱导仔猪胸腺的损伤机制及PRRSV抗独特型抗体

的免疫调控

猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratory

syndrome,PRRS)的病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveand

respiratorysyndromevirus,PRRSV)。该病在临床上主要引起母猪流产、死胎

或木乃伊胎,并引起育肥猪和仔猪的呼吸障碍。

1987年,美国首先报道该病,1996年我国首次分离并报道该病。PRRSV为单

股正链(+)RNA病毒,归类于动脉炎病毒科,动脉炎病毒属。

2006年5月,高致病性PRRS(HP-PRRS)从我国南方地区开始爆发,主要表现为

发病猪群的“三高”,即体温高、发病率高、死亡率高,HP-PRRS的爆发导致我国

养猪业损失巨大。许多研究表明,PRRSV变异毒株对中枢及外周免疫器官的噬性

显著增强,除能引起胸腺严重萎缩外,还能导致外周免疫器的出血、坏死、淋巴细

胞严重减少并伴随细胞凋亡现象。

目前,PRRS/HP-PRRS的防控仍然是兽医病毒学及免疫学界的难题,感染宿主

对PRRSV/HP-PRRSV的免疫应答仍不清楚。PRRSV/HP-PRRSV感染猪抗体产生较早

且抗体滴度较高,但早期产生的抗体难以保护机体免受病毒的感染,甚至发挥抗

体依赖性增强作用帮助病毒对机体造成更严重的伤害。

本课题在前期研究的基础上,进一步研究HP-PRRSV感染诱导仔猪胸腺内自

噬与凋亡情况,探讨HP-PRRSV对仔猪胸腺的损伤机制;研究PRRSV经典及变异毒

株弱毒疫苗抗HP-PRRSV的作用机理;通过使用PRRSVGP5的抗独特型抗体调控机

体的免疫网络,研究PRRSV感染与机体免疫网络的关系;探索PRRSV单克隆抗独特

型单链抗体的免疫生物学功能。为进一步研究机体对PRRSV的免疫反应机制及免

疫调控机制奠定基础。

1、PRRSV感染引起胸腺内细胞的自噬和凋亡的研究细胞死亡是被周密调控

的一系列复杂过程。凋亡,是一种程序性细胞死亡(programmedcelldeath,PCD)

方式,用于维持机体自身平衡和内环境稳定,该过程受基因严格调控。

自噬,也是程序性细胞死亡的一种方式,它是将受损的细胞器及大分子物质

依赖溶酶体降解供机体重新利用的过程。很多疾病的发生及发展过程中,细胞凋

亡与细胞自噬并存,它们在调控细胞死亡的过程中通路相互关联,互为调控。

胸腺作为哺乳动物的中枢免疫器官之一,既介导细胞免疫,又为T细胞分化、

发育提供场所。PRRSV感染可造成体内及体外培养细胞的凋亡及体外感染细胞的

自噬现象,然而,HP-PRRSV感染引起仔猪胸腺萎缩,在萎缩的胸腺内细胞自噬情

况未见相关报道。

本实验目的是通过流式细胞技术、Westernblot技术,研究HP-PRRSV感染

仔猪胸腺诱导胸腺细胞的自噬与凋亡情况;通过免疫荧光共聚焦技术,阐明

HP-PRRSV感染仔猪胸腺内病毒感染细胞、凋亡细胞与自噬细胞的关系,鉴定发生

自噬细胞的类型。实验结果显示:HP-PRRSV感染仔猪的胸腺内,既存在细胞自噬

现象,也存在细胞凋亡现象;自噬既可发生于病毒感染的细胞,也发生于病毒未感

染细胞;发生自噬的细胞为CD14+细胞及胸腺上皮细胞,而占有胸腺中细胞总数

85-90%的T细胞没有发生自噬,而发生了凋亡。

2、PRRSV不同毒株弱毒疫苗对HP-PRRSV免疫保护作用的研究自2006年

HP-PRRS在我国爆发以来,PRRSV疫苗在猪场中普遍使用。然而,由于PRRSV的免

疫机制目前尚不清晰,PRRSV疫苗的选择及使用尚存在很大的争议。

目前临床上流行的毒株以变异毒株为主,但经典PRRSV弱毒疫苗在使用中安

全性较高,并对HP-PRRSV有交叉保护性,在临床上也被广泛使用。因此,本实验选

用PRRSV经典株弱毒疫苗CH-1R株及变异毒株弱毒疫苗HuN4-F112毒株免疫断

奶仔猪,使用变异毒株HP-PRRSVHuN4攻毒后,通过观察临床症状、病理组织学

变化,检测血清中病毒载量、细胞免疫及体液免疫的变化,探讨不同毒株弱毒疫苗

对变异毒株的免疫保护作用。

实验结果显示:CH-1R、HuN4F112免疫的仔猪均有效的抵御HP-PRRSV的感