原创力文档- 1、本文档共5页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
丹青不知老将至，贫贱于我如浮云。——杜甫
张玉彬吴梧桐
（中国药科大学生物化学教研究室南京２１０００９）
哺乳动物细胞培养表达制备治疗性重组蛋白质药物已成为当今生物制药领
域中的主流技术。目前大约有６０％以上的重组蛋一质药物的生产采用哺乳动物细
胞培养技术。哺乳动物细胞制备的蛋白质药物质量高，它们１ｊ天然蛋白质具有相
似的理化・忖质和乍物学功能。以默克、基凶泰克等围际大公刮为代表的大规模流
加培养生产工艺，其反应罐体积可以达剑１０吨以上，蛋白表达浓度为
１．０—２．Ｏｇ／Ｌ。我闻从２０００年开始逐渐发展了该项技术，虽然起步较晚，基础较
差，但经过努力实现了该项技术的突破。本课题组目ｆｉ＿ｉＪｉＦ．在开展哺乳动物细胞表
达重组蛋自和抗体药物的研究和技术开发。
１９８７年ＦＤＡ批准了基因泰克公刮生产的ｔＰＡ，这是世界上第一个哺乳动物细
胞制备的重组蛋一质药物，当时基因泰克公司借鉴了细菌大舰模培养技术，在搅
拌式反应罐中大规模培养悬浮重组ＣｌＩＯ细胞制备ｔＰＡ。这是一项具有晕程碑性的
工作，标志着哺乳动物细胞制备重组蛋门时代的到来。
在过去的２０多年中，哺乳动物细胞制备重组蛋白技术发生了巨大的变化。主
要表现在（１）细胞培养时间延长，由过去的７天延长至２１天；（２）细胞密度
增加，由过去的卜２Ｘ１０６细胞／毫升，增加到现在的卜１．５Ｘ１０（３）
７细胞／毫升；
产量增加，过去为１０—２０ｐｇ重组蛋白／细胞／天，５０一１００ｍｇ重组蛋白／升，而现在
则为５０－９０ｐｇ重组蛋白／细胞／天，卜５９重组蛋白／升。这些变化的主要原因是人
们多年来对哺乳动物细胞大规模生产重组蛋白的关键之处进行了深入研究与优
化，主要集中在对细胞株、表达载体、基因转移、重组细胞筛选、培养基的组成
以及生物过程等方面的改造和优化。特别是补料流加技术的采用，使细胞在长时
间的培养过程中细胞数目多、且健壮活泼。遗憾的是这些技术掌握在少数公司手
中，没有公开化。为了提高重组哺乳动物细胞表达重组蛋白质的产量，一般可以
从以下两个方面着手：改进基因传输和遗传筛选的方法，以加速高产细胞株的发
现，另一方面则是开发高效的细胞培养系统，以便快速、低成本地筛选生物制备
过程的优化条件，通过优化补料策略提高细胞密度和细胞的存活率。为了减少成
本和节约时问，近年来国外又开展了大规模哺乳动物细胞培养瞬时表达（ＴＧＥ）制
备重组蛋白的研究。
１．重组细胞系
哺乳动物细胞大规模培养生产重组蛋白中，常用的细胞系有ＣＨＯ和１１ＥＫ２９３
两大类细胞。曾一度使用较多的ＣＯＳ细胞，由于强烈的贴壁作用，限制了大规模
悬浮细胞培养生产的实际应用。目前还有一些哺乳动物细胞株正在进行大规模培
１７４
丹青不知老将至，贫贱于我如浮云。——杜甫
养生产的研发中，如猿细胞衍生的Ｖｅｒｏ和ＣＶ－ｌ，以及人的胚胎干细胞等。
上世纪８０年代初期，Ｒｉｎｇｏｌｄ等首次报道采用非病毒性基因转移技术获得
了稳定性转染外源目的基因的哺乳动物细胞株，即永生化ＣＨＯ（Ｃｈｉｎｅｓｅ
ｈａｍｓｔｅｒ
ｏｖａｒｙ）细胞系。ＣＨＯ细胞足第一批采用的宿主细胞，是一种＿二氢叶酸还原酶营
养缺陷型细胞株。蟹白质制备过程中所采用的ＣＨＯ细胞于１９５７年山Ｐｕｃｋ等人将
原代培养的中围仓鼠卵巢细胞的永４ｉ化而获得。ＣＨＯ—Ｋｌ足由原始ＣｔｔＯ细胞衍生
的甘氨酸依赖型细胞株，并经进一步突变产牛为Ｃｌｌ沪ＤＸＢｌｌ，也
文档评论（0）