基于核酸适配体和阳离子聚合物PAH高效聚集纳米金比色法检测牛奶中四环素.pdfVIP

基于核酸适配体和阳离子聚合物PAH高效聚集纳米金比色法

检测牛奶中四环素

罗艳芳;贺兰;詹深山;刘乐;支月娥;周培

【摘要】为满足乳制品中四环素快速检测要求,开发了基于核酸适配体(aptamer)

和阳离子聚合物PAH高效聚集纳米金比色检测牛奶中四环素(TET)的新方法.本文

优化了PAH和适配体的浓度.最优实验条件下,四环素浓度在一定范围内与

A520/A650呈现良好的线性关系,最低检测限(LOD)为95nmol/L,对四环素具有良

好的选择性.该方法已成功用于牛奶中四环素的检测,回收率为108％～117％,相对

标准偏差为2.9％～3.6％.

【期刊名称】《上海交通大学学报（农业科学版）》

【年(卷),期】2014(032)006

【总页数】6页(P66-70,91)

【关键词】四环素;核酸适配体;PAH;纳米金;比色

【作者】罗艳芳;贺兰;詹深山;刘乐;支月娥;周培

【作者单位】上海交通大学农业与生物学院,上海200240;上海交通大学农业与生

物学院,上海200240;上海交通大学农业与生物学院,上海200240;上海交通大学农

业与生物学院,上海200240;上海交通大学农业与生物学院,上海200240;上海交通

大学农业与生物学院,上海200240

【正文语种】中文

【中图分类】X83

四环素是一种常见的广谱抗生素类药物,被广泛运用于人类细菌感染治疗及添加于

畜禽饲料中[1]。据报道,每年有5000t四环素被人类和动物消耗[2]。随着四环素

使用量的增加,其在食品和环境中的残留带来了一系列的问题,如:微生物抗药性增强、

超级细菌的产生,食用具有抗生素残留肉制品后导致的过敏现象及某些器官的病变

等等[3-4]。为了保障消费者食品安全,欧盟规定牛奶中四环素最大残留为225

nmol/L[5],美国食品药品监督管理局规定牛奶中四环素最大残留为900nmol/L[6]。

2002年,我国农业部修订的《动物性食品中兽药最高残留限量》中规定,牛羊奶以

及所有动物性食品中四环素类药物残留的最高残留量为225nmol/L。

目前,四环素的检测方法很多,最常见的有高效液相色谱法(HPLC)[7-8]、毛细管电泳

法(CE)[9]、液质联用(LC-MS)[10]、酶联免疫(ELISA)[11]及微生物抑制法[12]等等。

近年来,核酸适配体已被广泛运用于重金属离子[13]、生物分子[14]及细胞[15]等的

检测。此外,核酸适配体合成简单,价格低廉。纳米金是一种非常理想的信号传导材

料,具有很好的光学特征。利用其开发的比色生物传感器对环境监测、生物医药的

探索具有非常重大的意义[16]。

聚烯丙胺盐酸盐(PAH)是一种高效阳离子聚合物,不仅具有聚集纳米金的作用而且还

能通过静电作用和DNA片段结合。Weejeong等[17]已经利用PAH这一性质成

功开发出疟疾的诊断方法。本实验选取PAH作为一种有效的纳米金聚集剂,通过其

控制纳米金的聚集和分散状态使纳米金溶液产生颜色变化检测四环素的含量。

1.1主要仪器与试剂

M200pro微型板块分光光度计为瑞士Tecan集团产品;圆二色谱仪为日本JASCO

公司产品;分析电子显微镜JEM-2010HT为日本日立集团产品;恒温孵育器为

Eppendorf公司产品;四环素适配体[18]:5-

CGTACGGAATTCGCTAGCCCCCCGG-

CAGGCCACGGCTTGGGTTGGTCCCACTGCG-CGTGGATCCGAGCTCCACGTG-

3由中国上海英潍捷基贸易有限公司合成;四环素,氯金酸,柠檬酸三钠,PAH,庆大霉

素、卡那霉素、氯霉素、妥布霉素、柔红霉素、甲砜霉素、土霉素和金霉素购自西

格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司;牛奶样品购自于当地超市;所用试剂均为市售分

析纯试剂。

1.2纳米金制备[19]

纳米金制备过程中所需的玻璃器皿均先用酸液[HNO3∶HCl=3∶1(V/V)]浸泡过夜,

用超纯水清洗后烘干。将100mL0.01%的氯金酸加入烧杯中置于磁力加热搅拌器

上加热,充分沸腾后迅速加入3.5mL1.0%的柠檬酸三钠溶液。继续加热搅拌30

min后,溶液