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菌种与毒种选育技术

菌种和毒种是动物疫苗生产、检验与研究的基础。自然界存在着多种多样的

微生物，而且还在不断地出现新的株和型，由于生物制品用途的不同，所选择的

菌种和毒种也各异。有的需要致病力强，抗原性好的，有的则要求致病力弱仅有

感染性而无病害性，免疫原性高的菌（毒）种。

1、兽医生物制品菌（毒）种标准

生物制品用强弱菌毒种除毒力标准不同外，还需符合以下标准。（1）历史清楚，

流行地区，动物种毒，流行资料清楚，分离鉴定资料完整，传代、保藏、生物特

性检查方法明确。（2）生物性状明显，菌种的形态，培养特征和生化特性，血清

免疫学特性明显，菌毒种人工感染动物后的临床表现，病理变化特征明显等。（3）

遗传学上相对均一与稳定：菌毒种遗传性状的改变主要表现在形态特征，毒力和

反应原性等方面。提高或保持菌毒种均一性和稳定性的方法，就是经常进行挑选，

纯化，例如羊痘鸡胚化毒种在经羊体传2-4代复壮，纯化后方能用于制苗。（4）

反应原性与免疫原性优良：优良的反应原性与免疫原性是生物制品菌毒种标准的

重要指标。反应原性高，即使微量抗原进入机体即能产生强烈的免疫反应，在血

清学上会出现很高的特异性。优良的免疫原性物质能使免疫动物发生尽可能完善

的免疫应答，从而获得坚强的免疫力。通常也可通过浓缩，提纯或导入佐剂等方

法提高反应原性、免疫原性不高的菌毒种制品的免疫效果与免疫反应。（5）毒力

应在规定范围内：用于制造弱毒疫苗的毒种毒力，要尽可能弱性；而其他制品用

的则要强毒力毒种，但抗原性要尽可能高为准，强毒株细菌的毒性物质还含有毒

素物质，在未处理前的毒力极强，对动物是不安全的，所以必要对致病力进行测

定。

2、强菌（毒）种选育

强菌毒种广泛用于诊断制品，抗病血清，灭活疫苗和疫苗制品的效力检验，也用

于人工育成弱毒株的毒种，以及微生物学与免疫学、动物传染病等的研究。强菌

毒种常自疾病流行地区的典型病动物体内分离，在疾病流行初中期，病状病理变

化典型而又未经任何治疗的病历可分离到毒力强大，抗原性良好的自然毒株，如

我国的石门系猪瘟病毒，多杀性巴氏杆菌C44-1等。然后，从各地分离的自然强

菌毒株中筛选出符合标准的毒株，供生物制品制造和检验。其筛选程序，内容是：

（1）致病力测定：常用易感实验动物，本动物或鸡胚，易感细胞测定MLD（最

小致死量）或TCID50（50%细胞致病变量）。（2）抗原性测定：菌（毒）株的抗

原性包含抗原与相应抗体结合发生特异性反应的反应原性和刺激机体及致敏淋

巴细胞的免疫原性。反应原性多采用血清学方法测定，以抗体滴度，效价表示；

免疫原性多采用对免疫动物用定量原强菌毒株种毒液攻击测定，以保护率表示。

无论致病力测定或抗原性测定，均应设对照，否则无效。（3）稳定性测定：对适

应于在培养基、鸡胚或易感细胞上增殖培养，传代菌毒株的毒力（致病力）和抗

原性还要进行稳定性测定，以证明后代特性不变，才有使用价值，并参与筛选择

优。（4）根据致病力和稳定性测定，筛选出毒力强，抗原性好，性状稳定的菌毒

株，经增殖后进行冻干保存，冻干菌种于4℃保存，冻干病毒毒种于-20℃以下，

可保存多年。

3、弱菌（毒）种选育

弱菌（毒）种用于弱毒活疫苗，部分诊断制品和抗血清的制造，弱菌（毒）种的

主要特征是致病力极微弱或无致病力，免疫原性优良能使免疫动物获得坚强的免

疫力。据此，就必须从自然界筛选，或以人工改变野生型强毒株的遗传特性进行

培育获得。天然自然弱毒株拟或人工培育弱毒株，均由于DNA上核苷酸碱基顺序

的改变，而导致遗传性状突变的结果，获取弱菌毒种的传统方法主要有以下几种：

3.1利用病原自然弱毒株：某些传染病的病原在自然界中存在着具有免疫原性的

自然弱毒株，可以利用于生产活疫苗，例如鸡新城疫LaSota株，D10弱毒株是

从自然鸡群鸭群中分离到的。

3.2选择同源不同种的微生物种：选择与病原有一定血缘关系，在分类上同属不

同种，但具有一定交叉免疫原性，而天然宿主又不相同的微生物株作为疫苗株。

在这方面获得成功的有利用火鸡疱疹病毒作为防止鸡马立克氏病毒疫苗株，山羊

痘细胞致弱株用于预防绵羊痘和羊接触传染性脓胞皮炎，以及早年兽使用过的以

牛病毒性腹泻病毒接种防止猪瘟感染，当然最为著名的是英国人詹纳以牛痘病毒

防止人类天花这个古典而造福人类的尽人皆知的例子，至尽在我国仍然有人把接

种痘苗疫苗称之为种牛痘。

3.3人工传代致弱：在培养基中，组织细胞培养中，鸡胚内和非宿主动物体内连

续传代减弱病原的致病性，以之制作活疫苗。至目前为止