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GBxxxx—202x
食品安全国家标准
食品中色氨酸的测定
1范围
本标准规定了婴幼儿配方食品、特殊医学用途婴儿配方食品、特殊医学用途配方食品、婴幼儿谷
类辅助食品中色氨酸的测定方法。
本标准适用于婴幼儿配方食品、特殊医学用途婴儿配方食品、特殊医学用途配方食品、婴幼儿谷
类辅助食品中色氨酸的测定。
第一法酶水解-液相色谱法
2原理
试样以蛋白酶酶解，经甲醇-水稀释后，用反相液相色谱柱分离，荧光检测器或紫外检测器检测，
外标法定量。
3试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的一级水。
3.1试剂
3.1.1甲醇（CHOH），色谱纯。
3
3.1.2甲醇（CHOH）。
3
3.1.3乙酸（CHO），色谱纯。
242
3.1.4盐酸（HCl）。
3.1.5乙酸铵（CHNO），色谱纯。
272
3.1.6Tris碱（2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇）(CHNO)。
4113
3.1.7灰色链霉菌蛋白酶（XIV型；来源于灰色链霉菌）：活力≥3.5U/mg。
3.2试剂配制
3.2.1盐酸溶液（1.0mol/L）：量取83mL盐酸，注入300mL水中，混匀后加水稀释至1L。
3.2.2Tris缓冲液（0.1mol/L，pH=8.5）：称取6.06gTris碱于1000mL烧杯中，加水500mL溶解，
用1.0mol/L盐酸溶液调节溶液pH到8.5±0.05。室温下保存，保存期6个月。
3.2.3蛋白酶溶液（17.5U/mL）：称取0.05g灰色链霉菌蛋白酶，用Tris缓冲液溶解并定容至10mL，
使蛋白酶浓度为17.5U/mL，临用现配。
3.2.4乙酸铵溶液（10mmol/L，pH=4.0）：称取0.77g乙酸铵加入900mL水溶解，用乙酸调节溶液
pH到4.0±0.1后加水至1000mL，经0.22μm水相微孔滤膜过滤后备用。
3.3标准品
3.3.1L-色氨酸标准品（CHNO，CAS号：73-22-3）：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物
111222
质证书的标准物质。
1
GBxxxx—202x
3.4标准溶液配制
3.4.1L-色氨酸标准储备液（1.00mg/mL）：准确称取25mg（精确至0.1mg）L-色氨酸标准品于25mL
容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀。于4℃下保存，保存期6个月。
3.4.2L-色氨酸标准中间液（100μg/mL）：吸取L-色氨酸标准储备液1mL于10mL容量瓶中，加水
定容至刻度，混匀。于4℃下保存，保存期6个月。
3.4.3L-色氨酸标准系列工作液：分别移取L-色氨酸标准中间液20.0µL、100µL、500µL、1.00mL、
2.00mL、5.00mL于10mL容量瓶中，各加入2.40mL甲醇（3.1.1），加水定容至刻度，混匀。L-色氨
酸标准系列工作液的浓度分别为0.200μg/mL、1.00μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0
μg/mL。临用现配。
3.5材料
3.5.1螺纹带盖的离心管。
3.5.2微孔滤膜：0.22μm，有机相。
3.5.3微孔滤膜：0.22μm，水相
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