厌氧和微需氧环境生成方法—多功能气体置换法.docxVIP

T/CIQA10-2020

Ⅰ

T/CIQAX-XXXX

ICSXXX

AXXX

团体标准

T/CIQAx-xxxx

厌氧和微需氧环境生成方法—多功能气体置换法

AnaerobicandMicroaerobicEnvironmentGenerationMethods——MultifunctionalGasReplacementMethod

（征求意见稿-草案）

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国出入境检验检疫协会发布

T/CIQAX-XXXX

Ⅲ

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由中国出入境检验检疫协会进出口食品标准化技术委员会（CIQA/TC)提出并归口。

本文件起草单位：

本文件主要起草人：……

本文件知识产权归中国出入境检验检疫协会所有。任何单位或个人未经许可，不得以营利为目的，印制、出版、翻译、转发或复制全文或部分文字。

T/CIQA10-2020

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厌氧和微需氧环境生成方法—多功能气体置换法

范围

本文件规定了厌氧和微需氧微生物的培养方法。

本文件适用于厌氧和微需氧微生物的培养。

规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

技术要求

方法提要

基于气体置换原理，在密封良好培养罐内，进行单次或多次抽真空的同时填充混合气体，使培养罐内生成微需氧或者厌氧环境；联合使用钯催化剂，混合气中的H2气和培养罐内残余O2氧会在催化剂作用下生成H2O，使得培养罐内O2气浓度低至绝对厌氧。

设备

4.2.1多功能厌氧微需氧生成系统：包括主机和培养罐。

4.2.2氧气监控仪（可选）。

4.2.3混合气瓶（5%H2，10%CO2，85%N2）。

4.2.4打印机（可选）

操作步骤

仪器自检，打开仪器电源开关，进入初始界面，点击屏幕任意位置开始自检，仪器自检过程不要连接培养罐；如果自检未通过，按界面提示排除问题后，重新检测。

气源设置，自检通过，点击“设置”进入设置界面，点击“默认设置”，进入默认设置界面，进行气源设置，将无氧混合气瓶内气体配比输入气源设置填写框，气源配比示例：5%H2，10%CO2，85%N2。

注：第一次使用仪器、更换气瓶或者气源配比变化时需要进行气源设置。

5.3将培养罐连接到主机

5.3.1连接气管到培养罐，将待培养物，即接种有待培养微生物的培养皿、三角瓶、试管、均质袋等放入培养罐，罐盖锁紧密封，将连接仪器的气管连接到培养罐（采用快插接头仅需下压即可完成连接）。

5.3.2仪器显示屏幕上选择已连接的培养罐，点击下一步；当仪器连接多个培养罐时选择是否生成同一种气体环境，选择“是”代表所连接的多个培养罐参数一致，“否”代表所连接的多个培养罐参数可分别进行设置。

5.3.3选择运行模式，有5种模式可选，1）厌氧模式，2）6%微需氧模式，3)弯曲菌模式（5%微需氧模式），4）自定义一键启动模式（预设常用特殊气体浓度达到即开即用的目的），5）自定义气体模式（需要时可单独设置O2浓度或CO2浓度，气体参数不做记忆）。

5.3.4选择质量控制等级，设有0-5质量控制等级，默认质控等级为1级。仪器对气体输入压力、罐体连接密封性、培养罐密封性、罐盖密封圈密封性、催化剂活力等参数进行检测。根据设备年限、罐体密封件的老化程度可任意选择不同的质量控制等级，保证实验的准确性，数字越大则测试等级质控越严格。当使用其他混合气体，且其中有气体对催化剂活力有影响时选用数字0，此时关闭质量控制。仪器显示屏幕上，点击“下一步”。

5.4启动仪器，以上参数确认无误后，按START按钮启动程序。程序运行过程中进行压力检测、连接件性能测试、培养罐密封测试、罐盖密封圈测试和催化剂活力测试（催化剂活力测试只有在厌氧程序中进行）。

厌氧及微需氧生成结果

厌氧及微需氧条件生成，同时满足以下条件视为厌氧或者微需氧条件符合要求：

界面上对应连接的培养罐显示为“绿色”，

屏幕显示生成的气体浓度达到既定气体浓度时；

此时气体环境制备已完成，断开气管与培养罐连接，将培养罐放入相应培养条件下进行培养。

培养罐内气体成分实时监测，将氧气监控仪（无线探