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吉林省鹿结核病的流行病学调查

王春雨;杨莉;王全凯;宋占昀;刘金华;周亮;赵全民;幺乃全;王振国

【摘要】为掌握结核病在吉林省鹿群中的流行传播状况,从吉林省养鹿业富有代表

性地区的18个鹿场随机采集血清样本1856份作为研究对象,利用结核杆菌Ag85-

East6-mpt70抗原多联表达蛋白作为检测抗原,进行酶联免疫检测,调查吉林省鹿结

核病流行情况,结果发现,吉林省地区鹿群中存在结核病病例,且各地区间阳性率差异

显著或极显著(P0.05或P0.01),防疫部门应加强防控,防止疫病扩散.

【期刊名称】《中国畜牧兽医》

【年(卷),期】2010(037)010

【总页数】3页(P204-206)

【关键词】鹿结核病;流行病学;酶联免疫吸附试验

【作者】王春雨;杨莉;王全凯;宋占昀;刘金华;周亮;赵全民;幺乃全;王振国

【作者单位】吉林农业大学,长春,130118;吉林农业大学,长春,130118;吉林农业大

学,长春,130118;吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心,长春,130062;吉林出入

境检验检疫局检验检疫技术中心,长春,130062;吉林农业大学,长春,130118;吉林农

业大学,长春,130118;吉林农业大学,长春,130118;吉林出入境检验检疫局检验检疫

技术中心,长春,130062

【正文语种】中文

【中图分类】S858.9

鹿结核病是由结核杆菌引起的慢性、消耗性传染病,其主要病原菌为牛型分枝杆菌

(崔国印等,1990)。近30年来养鹿业在世界范围内迅速发展,与此同时鹿结核病在

世界各国的鹿场中均有发现,对鹿养殖业造成了严重的危害(Stuart等,1988;李太元

等,2002)。结核病在不同地区不同物种之间的流行性存在极大的差别,且结核病的

初期诊断难度较大,给畜牧业结核病的防控带来巨大的困难。因此,及时了解掌握结

核病在鹿群中的传播状况,对控制鹿结核病极为关键。吉林省是中国养鹿业最集中

地区,与全国各养殖区交流频繁,其鹿群中的结核病流行病学调查极为重要。本研究

通过酶联免疫法对吉林省的鹿群进行血清学检验,调查不同地区、不同性别的鹿在

未注射疫苗的情况下结核病发病及流行情况,为防疫部门制定防制措施提供科学的

理论依据,以确保养鹿业的健康发展。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1受检血清从吉林省18个鹿场(长春地区5个、吉林地区2个、通化地区3

个、四平地区4个、松原地区2个、辽源地区2个)鹿群中随机采取血样共1856

份,采样主要考虑因素为性别(公鹿、母鹿)、年龄(仔鹿0岁、育成鹿1～2岁、成

年鹿2岁以上)。血液离心后血浆抗凝处理,血清冷冻备用。

1.1.2标准抗原、标准阴、阳性血清多联表达蛋白抗原由中国农业科学院哈尔滨兽

医研究所细菌病研究室惠赠。阳性血清为经ELSIA检测D值高于1.5的灭活副结

核杆菌苗免疫鹿血清;阴性血清为ELSIA检测D值小于0.1的未哺母乳而死亡的仔

鹿血清。

1.1.3兔抗鹿酶标抗体辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗鹿IgG由吉林农业大学动

物科技学院预防兽医学实验室惠赠。

1.1.4其他材料磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、柠檬酸、邻苯二胺、吐温-20、

30%过氧化氢、浓硫酸、多标记分析仪、96孔酶标板、多道移液器(Eppendorf

m257074)。

1.2方法对鹿结核病均采用间接酶联免疫吸附试验方法(间接ELISA)进行检测。

1.2.1包被抗原用磷酸盐缓冲液将多联表达蛋白抗原作1∶800稀释后,包被酶标

板,50μL/孔,37℃过夜后用PBST3×3min洗涤。

1.2.2封闭1%明胶,150μL/孔,37℃湿盒封闭1h后用PBST3×3min洗涤。

1.2.3加被检血清将被检血清200倍稀释,50μL/孔,37℃湿盒封闭1h后用PBST

3×3min洗涤;同时设立阴、阳性标准血清对照。

1.2.4加HRP标记的兔抗鹿IgG将兔抗鹿酶标二抗作1∶2000稀释,加入反应板

中,50μL/孔,37℃感作1h后用PBST3×3min洗涤。

1.2.5显色加入现用现配的邻苯二胺-H2O2底物液,50μL/孔,37℃感作20min。

1.2.6终止反应加入2mol/LH2SO4终止液50μL/孔,室温静置5min。

1.2.7测D值采用多标记分析仪,在490