动物疫苗生产工艺研究的现状分析 .pdf

动物疫苗生产工艺研究的现状分析

作者：邵三敏吕宁宁马冬王宗升牛营许荣强贾鑫玉

来源：《中国动物保健》2024年第03期

摘要：动物疫苗规模化生产中受到多种因素影响，通过调控细胞培养技术、病毒扩增和发

酵工艺等优化动物疫苗工业化生产工艺。本文章拟综述分析动物疫苗生产工艺研究现状。

关键词：动物；疫苗；生产工艺；现状

近年来，随着动物疫苗生产工艺的发展，主要通过细胞培养技术和生物发酵工程技术获得

动物疫苗产品。在细胞培养技术中，细胞密度和病毒扩增效率是动物细胞大规模培养生产工艺

中决定动物疫苗产量的两个重要因素，而细胞密度又受到细胞培养方式、培养基成分、血清含

量、培养环境等的影响，病毒扩增效率主要是由稳定高效表达目的产物的细胞系、病毒感染复

数、感染时间、收获时间等决定的，因此可通过调控动物细胞培养环境的营养供给和生物反应

器操作参数，建立满足大规模工业化生产动物疫苗的高效生产工艺[1-3]。而生物发酵工程技术

中以酵母菌表达系统和大肠杆菌表达系统作为主要的表达产物系统，通过调控菌体生长条件以

便收获高水平的蛋白产物，用于制备动物疫苗[4-6]。现从以下几方面阐述影响动物疫苗生产工

艺的决定性因素。

细胞培养技术1

细胞培养方式1.1

动物疫苗规模化生产的发展初期，主要以转瓶培养的生产工艺收获病毒，该工艺因存在不

同批次产品病毒产量差异大、效率低和成本高、培养工艺难以逐级放大等问题，在2012年农

业部发布的第1708号公告中显示转瓶培养生产方式的兽用细胞苗生产线自公告起停止受理生

产线项目兽药GMP验收申请[7]。而微载体系统悬浮于细胞培养基中，使得细胞生产环境均

一，便于进行实时控制与检测，且表面积/体积比大、培养基利用率高、放大工艺较容易，因

此微载体悬浮培养动物细胞的生产反应器成为首选验收GMP生产线以及工业化生产的首选方

案。

梅建国等[8]采用Cephodex微载体体系在生物反应器中悬浮培养高密度BHK-21细胞，接

毒后收获伪狂犬病病毒抗原，结果显示，该生产工艺中细胞密度和病毒浓度均是转瓶工艺中的

3倍多。而王丽平[9]等采用流加3%比例的BHK-21细胞流加培养基培养BHK-21细胞扩增伪

狂犬病病毒，建立的无血清悬浮培养细胞工艺获得的病毒滴度高达9.25lgTCID50/mL，比不

流加组病毒滴度提高了0.92lgTCID50/mL，表明采用生物反应器无血清悬浮培养细胞高效扩

增病毒是可行的。解长占等[10]通过生物反应器培养HEK293细胞并接种高致病性猪蓝耳病重

组腺病毒，在接毒后36～60h病毒增殖速率较快，在接毒后60h病毒滴度最高为1.0×1010

TCID50/mL。而任培森等[11]通过微载体培养技术进行Marc-145细胞培养和接毒后结果显示，

最佳细胞接种密度为2.6×105/mL，比转瓶培养的细胞密度高2.1倍，高致病性猪蓝耳病毒滴度

比转瓶培养高0.46lgTCID50/mL。

培養基1.2

培养基主要是在动物细胞培养过程中为细胞提供物质与能力需求，主要含有葡萄糖、氨基

酸、无机盐和维生素等，维持细胞生长，其外还需添加为细胞提供生长因子的血清，促进产物

生成。但因血清的添加，易造成外源病原体污染，且由于其成分复杂，会增加动物疫苗分离纯

化的负担。针对血清的诸多问题，人们研究出血清的替代物质，如低分子量营养因子、生长因

子、扩展因子等，因不同细胞在培养过程中所需的营养物质种类与含量不尽相同，因此在使用

前需要对其进行选择与优化以满足对细胞培养的需求[12]。但这样会增加时间成本，因此出现

了无血清培养基，目前开发出了对不同细胞培养的无血清培养基，几乎可用于培养普遍使用的

细胞系，其可避免外源性污染、降低纯化成本、克服血清批次间的差异性。

尽管如此，以MDCK细胞、Vero细胞等贴壁细胞培养生产动物疫苗的工艺中，因血清可

保护细胞免受剪切力损伤，益于贴壁细胞的生长，在培养细胞过程中仍需添加含有2%～10%

血清的培养基培养细胞至所需密度时，再更换为无血清培养基进行病毒扩增。

培养1.3环境

在生物反应器中的细胞大规模培养过程中，温度、pH值、二氧化碳含量、溶氧、渗透

压、代谢产物浓度、通气速率和搅拌速度等决定细胞生产状态与密度，因此，需监测细胞比生

长速率、营养物比消耗速率、代谢产物比生成速率、二氧化碳释放率、摄氧率等生化指标进而

分析细胞生产和代谢情况[13