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化学诱导小鼠先天性肾积水动物模型的实验研究

目的：探討一种化学诱导小鼠先天性肾积水动物模型的方法。方法：将

C57BL/6J孕鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。在第12个妊娠日（GD），

对照组采用玉米油灌胃，实验组采用2，3，7，8-四氯二苯并二噁英（TCDD）

灌胃。GD18，统计胎鼠的数量、存活率以及畸形发生情况。分析胎鼠及孕鼠各

主要脏器组织学结构，电镜观察胎鼠输尿管和肾脏的超微结构。结果：GD18，

对照组胎鼠的输尿管和肾脏均正常。实验组胎鼠肾积水发生率为100%（3级

86.2%，4级13.8%）。实验组胎鼠下段和中段输尿管黏膜层移行上皮增生，管腔

狭窄，输尿管上皮细胞核仁明显，靠边，核大，染色质丰富，异染色质少，常染

色质发达；肾间质纤维化，肾小管结构模糊，上皮细胞肿胀，膜性结构破裂。对

照组胎鼠肾积水发生率低于实验组。结论：TCDD所诱导的胎鼠肾积水动物模型，

与人类肾盂输尿管连接处梗阻（UPJO）在病理学表现上类似，可用于UPJO发

病机制与病因学等方面的研究。

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1受试动物由重庆医科大学实验动物中心提供的10～12周龄清洁级

C57BL/6J小鼠，饲养于清洁级笼具，设置环境湿度为55%±5%，温度为23～

25℃，光照为12h/12h明暗交替。适应新环境一周后，雌雄鼠合笼交配，雌鼠

外阴出现阴栓当日作为第0个妊娠日（GD）。

1.1.2主要试剂美国Sigma-Aldrich公司提供TCDD和玉米油；北京化学试

剂公司提供多聚甲醛；苏木精染液、伊红染液、盐酸酒精、二甲苯、中性树胶、

4%戊二醛、1%锇酸、甲苯胺蓝、醋酸双氧铀、枸橼酸铅由重庆川东化工有限公

司化学试剂厂提供。

1.1.3主要仪器H-600透射电镜由日本Hitachi公司提供；解剖显微镜由日

本Nikon公司提供；显微摄像系统、光学显微镜购自日本Olympus公司。

1.2实验方法

1.2.1实验分组与处理孕鼠被随机分为对照组与实验组，每组10只。GD12，

对照组采用玉米油灌胃，实验组采用TCDD（25μg/kg，用玉米油配制成2μg/mL）

灌胃。GD18，处死孕鼠，取孕鼠的心脏、肝脏、肺和肾脏等主要器官用作组织

学观察。统计胎鼠的存活情况及数量，有无吸收胎及死胎，对胎鼠进行称重后处

死，解剖胎鼠，观察胎鼠是否存在畸形，对胎鼠各主要脏器进行组织学观察。在

两组胎鼠中各随机抽取1只，取其肾脏和输尿管，用于超微结构观察。

1.2.2组织学观察以4%多聚甲醛固定孕鼠及胎鼠各脏器标本6h，石蜡包

埋、切片，再进行苏木精-伊红（HE）染色。以下为具体操作步骤：切片经二甲

苯、梯度酒精脱蜡至水，苏木精染液染色5～15min，0.5%盐酸酒精分色30s，

流水冲洗15～30min，0.1%伊红染液染色2min，再经70%、85%、95%、100%

酒精梯度脱水，每级脱水2～3min，二甲苯透明2次，中性树胶封片，光学显微

镜下观察。

1.2.3肾积水程度分级参照文献[8]，根据积水的程度，将胎鼠肾积水分为

五级。

1.2.4透射电镜观察4℃条件下，以4%戊二醛将切割成约0.1cm3大小的

新鲜胎鼠肾脏组织与输尿管预固定2h，0.1MPBS漂洗3次。1%锇酸固定1h

后，再以0.1MPBS漂洗3次。丙酮梯度脱水，环氧树脂包埋，制备半薄切片，

甲苯胺蓝染色，光学显微镜定位。最后制备超薄切片，醋酸双氧铀和枸橼酸铅染

色，透射电镜下观察和照相。

2结果

2.1TCDD对孕鼠的影响两组孕鼠均无脱毛，皮毛色泽光亮，活动、饮水及

摄食正常，无早产及流产，各主要脏器大体解剖与组织学表现均正常。

2.2TCDD对胎鼠的影响对照组胎鼠共68只，无腭裂表现，膀胱、双侧输

尿管及肾脏均正常，其余各主要脏器也均正常。实验组胎鼠共65只，均伴有腭

裂，下段输尿管及膀胱外观正常，双侧上段輸尿管及肾盂积水扩张明显，输尿管

中段扭曲、折叠（图1），其余各脏器均正常。两组胎鼠均为活胎，无吸收胎及

死胎。

注：①为对照组，②为实验组。白色箭头指示为肾盂，黑色箭头指示为输尿

管。