葡萄酒中 4 种黄酮类物质的测定 高效液相色谱-质谱法.pdf

葡萄酒中4种黄酮类物质的测定高效液相色谱-质谱法

1范围

本文件规定了葡萄酒中4种黄酮类物质（槲皮素、烟花苷、芦丁、黄岑素）的高效液相色谱-串

联质谱检测方法。

本文件适用葡萄酒中4种黄酮类物质的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本

文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经80%甲醇溶液涡旋超声提取，取上清液，经分散固相萃取净化，用高效液相色谱-质谱

联用仪检测，外标法定量。

5试剂和材料

本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1乙腈：色谱纯。

5.1.2甲醇：色谱纯。

5.1.3甲酸：色谱纯。

5.1.4十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：40μm~60μm。

5.1.5无水硫酸镁（MgSO）粉末：粒径50μm。

4

5.1.6N-丙基乙二胺（PSA）粉末:粒径50μm。

5.1.70.1%甲酸溶液：取甲酸（5.1.3）1.0mL，用水定容到1000mL，摇匀。

5.1.880%甲醇溶液：取甲醇（5.1.2）800mL，用水定容到1000mL，摇匀。

5.2标准品

4种黄酮类物质中英文通用名称、化学分子式和CAS号见附录表A。

5.3标准溶液配制

1

5.3.1标准储备液（1.0mg/mL）：分别准确称取4种黄酮类标准品10mg（准确至0.1mg），用甲醇

（5.1.2）分别溶解并定容至10.0mL，于-18℃避光保存，有效期3个月。

5.3.2混合标准中间液（100.0μg/mL）：分别准确吸取标准储备液（5.3.1）1.0mL，用甲醇（5.1.2）

溶解并定容至10.0mL，于-18℃避光保存，有效期1个月。

5.3.3基质混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液（5.3.2）适量，用初始流动相配制成

浓度为10.0ng/mL~500.0ng/mL的标准工作液，临用现配。

6仪器和设备

6.1高效液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源(ESI)。

6.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。

6.3涡旋混合器。

6.4离心机：最大转速9000r/min。

6.5超声波发生器。

6.6有机微孔滤膜，孔径0.22μm，或相当者。

7分析步骤

7.1试样制备

取代表性样品摇匀分装，密闭常温或冷藏保存。

7.2测定步骤

称取5g样品（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入10mL80%甲醇溶液（5.1.8），涡旋震荡

5min，8000r/min离心5min。移取上清液至装有50mgC18（5.1.4）、100mg无水MgSO4（5.1.5）和

30mgPSA（5.1.6）的离心管中，涡旋混合2min，8000r/min离心5min，有机滤膜过滤后，供高效

液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3仪器参考条件

7.3.1液相色谱参考条件

a）色谱柱：C18，2.1mm×100mm，粒径3.5μm或性能相当者。

b）柱温：40℃。

c）流动相：A：0.1%甲酸溶液，B：乙腈；梯度洗脱见表1。

d）流速：0.3mL/min。

e）进样量：10μL。

表1流动相及梯度洗脱条件

时间/min流速/（mL/min）流动相A/%流动相B/%

0.000.3955

1.000.3955

5.00