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反相高效液相色谱法测定豆制品中碱性橙2

丁晓静;张晶;邵兵;赵珊

【摘要】目的着重考察豆制品中碱性橙2的样品前处理方法,建立有效的高效液相

色谱检测方法.方法样品经水-乙酸-乙酸铵-乙腈超声萃取,-20℃C冷冻后离心去除

提取液中少量油脂等杂质,酸化后以混合型阳离子交换固相萃取柱净化;0.4％乙酸-

20mmol/L乙酸铵水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,C18色谱柱分离,外标法定量.结

果方法检出限为0.13mg/kg,定量限为0.4mg/kg;腐竹中添加水平分别为0.5、

5.0和10.0mg/kg的平均回收率为77.8％～83.6％,相对标准偏差为3.0％～3.5％

(n=6).结论该前处理方法能够有效提取、净化豆制品中碱性橙2,适用于液相色谱

检测.

【期刊名称】《首都公共卫生》

【年(卷),期】2017(011)006

【总页数】3页(P259-261)

【关键词】高效液相色谱;碱性橙2;豆制品

【作者】丁晓静;张晶;邵兵;赵珊

【作者单位】100013,北京市疾病预防控制中心/北京市预防医学研究中心/食物中

毒诊断溯源技术北京市重点实验室;100013,北京市疾病预防控制中心/北京市预防

医学研究中心/食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验室;100013,北京市疾病预防

控制中心/北京市预防医学研究中心/食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验

室;100013,北京市疾病预防控制中心/北京市预防医学研究中心/食物中毒诊断溯源

技术北京市重点实验室

【正文语种】中文

【中图分类】R155.5+2

碱性橙2(chrysoidine)亦称王金黄、块黄，CAS:532－82－1，分子式C12H12

N4·HCl，相对分子质量为248.72。因具有与蛋白结合牢固的特点而被不法分子用

于豆制品染色。《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》

中明确了豆腐皮中添加王金黄。由于豆制品在大众的日常饮食中占有较大比重，该

物质的添加将极大危害人民群众的健康。因此，建立简便、快速、准确的方法检测

该违法添加成分十分必要。高效液相色谱法和高效液相色谱—质谱/质谱联用法成

为目前检测非法添加工业染料的主要方法［1－13］。本实验室曾经建立了超高效

液相色谱—电喷雾串联四极杆质谱法检测豆制品中12种禁用工业染料的筛查确证

方法［6］，于2017年3月在该法基础上，针对着色能力强的碱性橙2开展样品

前处理研究，进一步优化样品提取、净化条件，提高液相色谱法的检测灵敏度，从

而解决实际样品中碱性橙2的准确测定问题。将该法用于实际样品的检测，获满

意结果。

1实验部分

1.1仪器和试剂Waters2695－996型高效液相色谱仪，配备二极管阵列检测器。

Milli-Elix/RiOs超纯水仪(美国Millipore公司);VortexGenie2型多用途旋涡混合

振荡器(美国ScientificIndustries公司);08855－02型超声波清洗仪(美国Cole-

Parmer公司);低温离心机(美国Beckman公司)。Oasis混合型阳离子交换(MCX)

固相萃取柱(3mg，6cc，美国Waters公司);冰乙酸(≥99.8%，北京化学试剂公

司);乙酸铵(分析纯，北京化学试剂公司);甲酸、氨水(优级纯，北京化工厂)、乙腈、

甲醇(色谱纯，Dikma科技有限公司)。

1.2标准溶液配制标准储备液:准确称取适量碱性橙2标准品，用少量50%乙腈水

溶解，再用乙腈定容，制成1000mg/L标准储备液，－18℃以下保存，标准储

备液在12个月内稳定。标准系列工作液:用80%乙腈—水将标准储备液稀释成

0.50、1.0、2.0、5.0、10.0和15.0mg/L作为工作曲线，临用时配制。1.3阳性

腐竹样品的制备为了体现与实际样品的一致性，本实验室制备了腐竹阳性样品，

具体方法:将腐竹样品粉碎、加入适量碱性橙2标准溶液，充分混匀，冷冻干燥、

备用。该阳性样品用于优化前处理方法。

1.4样品提取称取1g(精确到0.01g)粉碎的豆制品样品于50mL塑料离心管内，

先加入2.5mL0.4%乙酸—20mmol/L乙酸铵水溶液、混匀，然后再加入10mL

乙腈，涡旋混匀15s，超声提取30min，静置分层，4℃90