幼狗肾(MDCK)细胞的换液与继代 .pdfVIP

实习六幼狗肾（MDCK）传代细胞的换液与继代

目的：认识MDCK传代细胞的形态并掌握其换液与继代操作技术。

材料：MDCK传代细胞、0.02%EDTA、MEM营养液、小牛血清、注射

器（2ml、10ml）、吸管、细胞瓶等。

内容与方法：

1．普通光学显微镜下观察MDCK传代细胞的显微形态。

2．每90mlMEM水解乳蛋白液加10ml小牛血清。

3．换液。

将长有细胞的瓶壁转向上方，用注射器从瓶底吸去旧营养液，再加入

新营养液，盖紧胶塞，然后将培养瓶反转复原位放置37℃继续培养。

4．继代。

吸（倒）去旧营养液，加入2mlEDTA液漂洗，吸去，再加入5滴EDTA，

使其与细胞接触，放置37℃作用30秒--2分钟不等，在显微镜下观察，

待细胞变园后吸去EDTA，然后加入20ml新营养液，用注射器反复冲

散细胞，最后分为3瓶（6~7ml/瓶），在瓶上方做好标记，置37℃CO

2

培养箱内培养。