基于液相色谱-质谱联用技术的重组人生长激素低丰度产品相关物质结构表 .pdfVIP

第52卷分析化学FENXI（HUAXUE）研究报告第3期

2024年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry380~388

DOI:10.19756/j.issn.0253-3820.231122

基于液相色谱-质谱联用技术的重组人生长激素低丰度产品相关

物质结构表征

刘海龙1,2冯佳2张金亮1,2王舒越2刘锋2张飞飞2孙丹丹2

焉梦寒2杨新2王英武*1,2

1（吉林大学生命科学学院，长春130023）2长春金赛药业有限责任公司（，长春130012）

摘要重组人生长激素Recombinant（humangrowthhormone，rhGH）是一种采用基因工程技术在大肠杆菌

中表达的蛋白质药物，广泛用于治疗儿童及成人生长激素缺乏症等多种疾病。在rhGH药物工艺开发与生

产过程中，可能产生多种产品相关物质，对药物质量构成潜在影响。因此，对rhGH主成分及产品相关物质

进行深入的结构表征和合理的质量控制对保障药品质量具有重要意义。《欧洲药典》收录了用于rhGH产

品相关物质质量控制的反相高效液相色谱方法，以及高丰度色谱峰的结构鉴定信息，但对于低丰度产品相关

物质的结构分析并没有详细记载。本研究采用反相高效色谱与液相色谱-质谱联用技术，成功分离并鉴定了

rhGH产品中的3种低丰度产品相关物质。研究结果表明，rhGH低丰度产品相关物质普遍含有多种修饰或

罕见修饰，包括N99和N149双位点脱酰胺、N端缺失两个氨基酸同时N149脱酰胺、Q122脱酰胺、N端氨基甲

酰化和N端丁二酰化，其中首次在rhGH中发现N端丁二酰化修饰。本研究对rhGH产品相关物质进行了深

入表征，为rhGH药物的研发和工艺改进提供了依据。

关键词重组人生长激素；结构表征；产品相关物质；翻译后修饰；液相色谱-质谱联用

生长激素Growth（hormone，GH）是一种由人脑垂体前叶分泌的蛋白质激素，可与生长激素受体结合，

诱导胰岛素样生长因子1（Insulin-likegrowthfactor，IGF-1）分泌，从而促进人体骨骼的生长发育。

1958年，Raben等[1]首次从人脑垂体中提取人生长激素Human（growthhormone，hGH），用于治疗生长激

素缺乏症；1982年，基因重组人生长激素Recombinant（humangrowthhormone，rhGH）获批用于生长激素

缺乏症的临床治疗，主要适应症为内源性生长激素缺乏引起的儿童矮小症[2]。自此，研究者开始对rhGH

进行了广泛的研究和应用探索。近年来，rhGH在促进脂肪分解和肌肉再生[3]、神经保护[4]、烧烫

伤[5][6][3]

、辅助生殖和肝组织再生等领域的作用也被逐步发掘。截至2023年，rhGH在全球范围内的临

床应用历史已超过40年，获批的适应症达十余种。

随着生物技术的发展和进步，rhGH的表达系统和生产工艺也经历多次迭代改进[7]，天然GH分子无

糖基化修饰，因此，绝大部分生产商选择原核表达系统对rhGH进行规模化生产。在原核表达系统中，分

泌型大肠杆菌表达技术借助特殊设计的信号肽将目标蛋白引导至周质腔，使其以可溶形式表达，有助于

维持天然构象并避免被胞内蛋白酶降解。

人用药品技术要求国际协调理事会The（internationalcouncilforharmonisationoftechnical

requirementsforpharmaceuticalsforhumanUse，ICH）Q6b[8]指导原则中，将杂质分为产品相关物质

Product（-relatedsubstances）