无标记实时定量检测5-羟甲基胞嘧啶和去甲基化酶的方法研究.pdf

目录

摘要I

AbstractIII

第一章前言1

1.15-羟甲基胞嘧啶1

1.1.15-羟甲基胞嘧啶的简介1

1.1.25-羟甲基胞嘧啶的检测意义1

1.2去甲基化酶FTO2

6

1.2.1N-甲基腺苷的简介2

1.2.2FTO的简介2

1.2.3FTO的检测意义3

1.35hmC和FTO的传统检测方法3

1.45hmC和FTO的新型检测方法3

1.4.1单分子法4

1.4.2荧光法6

1.4.3色谱法8

1.4.4光电化学法10

1.4.5电化学发光法12

1.5实时定量检测方法14

1.6本论文的研究内容17

第二章基于糖基化介导的荧光生物传感器无标记实时检测癌细胞中的5-羟甲基胞嘧啶.18

2.1引言18

2.2实验部分19

2.2.1试剂、仪器和寡核苷酸序列19

2.2.2实验方法21

2.3结果与讨论22

2.3.1特异性位点5hmC检测原理23

2.3.2可行性验证25

2.3.3优化实验条件28

2.3.4灵敏度分析30

2.3.5特异性分析31

2.3.6混合物中特异性位点5hmC的测定32

2.3.7重现性分析33

2.3.8回收率分析34

2.3.9细胞内特异性位点5hmC的检测35

2.4结论35

第三章基于受控底物降解的生物传感器无标记实时检测FTO活性37

3.1引言37

3.2实验部分38

3.2.1试剂、仪器和寡核苷酸序列38

3.2.2实验方法40

3.3结果与讨论42

3.3.1FTO的检测原理42

3.3.2可行性验证43

3.3.3实验条件的优化44

3.3.4灵敏度分析46

3.3.5特异性分析47

3.3.6抑制剂分析48

3.3.7酶活动力学检测49

3.3.8重现性分析50

3.3.9回收率分析50

3.3.10癌细胞中FTO的活性检测51

3.3.11癌细胞中FTO的抑制剂分析52

3.3.12临床样品中FTO的检测53

3.4结论54

第四章总结56

参考文献57

攻读学位期间发表的学术论著73

致谢74

摘要

实时荧光定量PCR（real-timefluorescencequantitativePCR，qPCR）和生物发光技术

都是分子生物学中用于检测和定量生物分子的技术，尽管它们的原理有所不同，但它们

存在一些共同点：两者都允许在反应过程中实时监测生物分子的信号变化。qPCR通过荧

光信号的积累实时监测PCR进程，而生物发光方法则通过光信号的变化来监测三磷酸腺

苷（adenosinetriphosphate，ATP）的水平或