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中幽兽医杂志２００６年（第４２卷）第３期１７

兔Ｅｔ一玫瑰花环形成实验方法探讨

王娅，邓俊良，王勇，万恩怀，陈仕均，陈俊杰

（四川农业大学动物科技学院，四川雅安６２５０１４）

中图分类号：￥８５２．４文献标识码：Ｂ文章编号：０５２９—６０Ｏ５（２００６）０３００１７－Ｏ１

淋巴细胞是体内最主要的免疫活性细胞，由于（ＥＤＴＡ：０．２ｍｇ／ｍ１），加４ｍｌ双蒸水，待２ａｒｉｎ后再

其表面标志和功能不同，可将其分为Ｔ淋巴细胞和用吸管反复吹打直到红细胞完全破碎，然后加入５

Ｂ淋巴细胞两大主要类型。Ｔ淋巴细胞区别于Ｂ淋ｍｌ３７的Ｈａｎｋ’Ｓ液（含５水解乳蛋白），混匀后离

巴细胞的独特标志是前者表面有ＣＤ２分子，即为红心，转数为２５００ｒ／ｍｉｎ。再用３７Ｃ的含５水解乳蛋

细胞受体（ＥＲ），这种受体能与动物的红细胞结合形白的Ｈａｎｋ’ｓ液，连续洗涤３次直到洗涤液完全透明

成玫瑰花结，称Ｅ一玫瑰花环实验。Ｅ一玫瑰花环实验为此。待洗涤完后弃掉上清液，剩余０．５ｍｌ沉淀物

中常用的是总花环（Ｅｔ）实验和活性花环（Ｅａ）实验。即为淋巴细胞悬液同时用５水解乳蛋白的

Ｅ卜玫瑰花环实验反映的是外周血液中总的Ｔ淋巴Ｈａｎｋ’Ｓ液稀释此悬液使淋巴细胞浓度约为１×ｌ０

细胞的数量和活性，由此可以间接反映机体的细胞个／ｍｌ。

免疫功能状况。１．５花环的形成取洁净的试管一只，加入０．５ｍｌ

有关猪、牛、鸡、羊等动物的Ｅｔ一玫瑰花环形成实淋巴细胞悬液和０．５ｍｌ绵羊红细胞悬液，混合均

验方法已见具体的报道，但兔Ｅｔ一玫瑰花环形成实验匀，放在３７（、的水浴锅中作用１ｈ，取出试管以５００ｒ／

的具体方法未见报道，仅解放军第２０８医院李春子ａｒｉｎ离心１０ａｒｉｎ后放入４Ｃ过夜。次日取出后试管轻

等报道，在体外一定的实验条件下，绵羊红细胞与兔轻抖动使沉淀物再一次悬在液体中，立即加入０．８

Ｔ淋巴细胞混合形成的Ｅｔ一玫瑰花环的结合率约为戊二醛３～５天滴在４（、中固定１ｈ。待固定好后，涂

１４＿】］，但具体的实验方法未见报道。笔者于２００４片，自然干燥，瑞一姬染色３ａｒｉｎ，油镜观察。

年７月进行了兔的Ｅｔ一玫瑰花环实验有关的探索，报１．６镜检计数凡一个Ｔ淋巴细胞吸附３个或３个

告如下。以上绵羊红细胞的花结即为一个Ｅ卜玫瑰仡环。计

２００个淋巴细胞数，求出Ｅｔ玫瑰花环结合率。

ｌ材料

２结果

１．１被检动物种兔６只，由本院种兔场提供的品

种一致的青壮年健康兔；健康绵羊１只，由四川Ｉ农业６只健康兔Ｔ淋巴细胞与健康绵羊红细胞结合

大学动科院种羊场提供。率分别为：１６、１５Ｋｏｏ、１４、１２、１１、１１。平均

１．２试剂ｐＨ值为７．４无钙镁Ｈａｎｋ’Ｓ溶液；结合率为１３．５±２．５。

Ａｌｓｅｖｅｒ血细胞保存液；生理盐水