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人脐带间充质干细胞检测技术规范

1范围

本文件给出了人源脐带间充质干细胞质量检测的技术要求和检测方法。

本文件适用于人源脐带间充质干细胞质量检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T42076.1-2022生物技术细胞计数第1部分：细胞计数方法通则

WS213丙型肝炎诊断

WS273梅毒诊断

WS293艾滋病和艾滋病病毒感染诊断

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

间充质干细胞MesenchymalStemCells

是中胚层来源的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞，广泛存在于全身多种组织中，可在体外培养扩增，并在特定条件下分化为神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞等。

3.2

人脐带间充质干细胞humanumbilicalcordmesenchymalstemcells

人脐带间充质干细胞是指来源于脐带的间充质干细胞。

3.3

流式细胞术flowcytometry

利用流式细胞仪快速定量分析细胞群的物理化学特征以及根据这些物理化学特征精确分选细胞的技术，主要包括流式分析和流式分选两部分。

3.4

细胞表型cellphenotype

2

是某种细胞或者细胞亚群表达一些重要的抗原分子的情况，明确细胞表达这些抗原分子的情况可以从一定程度上判断这群细胞的某些特征，也可以从一定程度上判断该群细胞的功能状态。

3.5

成骨诱导分化osteogenicdifferentiation

通过特定的培养条件，诱导间充质干细胞分化为骨原细胞、成骨细胞，进而形成骨组织的过程。

3.6

成脂诱导分化adipogenicdifferentiation

通过特定的培养条件，诱导间充质干细胞分化为脂肪细胞的过程。

3.7

成软骨诱导分化chondrogenicdifferentiation

特定的培养条件，诱导间充质干细胞分化为软骨细胞的过程。

3.8

核型karyotype

细胞有丝分裂中期所具备的整套染色体数目、长度、着丝点位置、随体、主缢痕和次缢痕等特征。

3.9

干细胞对淋巴细胞增殖抑制检测stemcellinhibitiononlymphocyteproliferation

干细胞对淋巴细胞增殖抑制检测是用于评估干细胞对免疫应答的调控作用的方法。常见的检测方法包括：干细胞共培养实验和细胞因子分析。

3.10

干细胞共培养实验stemcellcocultureexperiment

将干细胞与淋巴细胞一起培养，并观察干细胞对淋巴细胞增殖的影响。

4技术要求

4.1总则

4.1.1实验室各设备在使用前需认真阅读设备说明书，确认设备状态，规范操作，使用后需填写设备使用记录。

4.1.2实验所需试剂在使用前需认真阅读产品说明书，注意易燃、有毒有害试剂的规范操作，使用前后需做试剂出入库登记。

4.2重要质量属性

4.2.1细胞形态

细胞贴壁培养时呈纺锤形和梭形的成纤维细胞态，形态均一。

3

4.2.2细胞计数及细胞活率

细胞活率≥90%。

4.2.3染色体核型

正常核型应为46，XX或46，XY。

4.2.4细胞表型

表1细胞表型要求

Positive(≥95%+)

Negative(≤2%+)

CD105

CD45

CD73

CD34

CD90

CD14orCD11b

CD79αorCD19

HLA-DR

4.2.5三系分化

具有成骨、成软骨、成脂的分化潜能。

4.2.6成瘤性

免疫缺陷动物（如小鼠）体内成瘤试验结果为阴性。

4.2.7微生物

细菌、真菌、支原体、HIV、HAV、HBV、HCV、HTLV、HCMV、HPVB19、EBV、TP、COX应为阴性。

4.2.8干细胞对淋巴细胞增殖抑制

评估干细胞对免疫应答的调控作用，具体要求见检测方法。

5检测方法

5.1细胞形态

二维培养条件下，用明视场细胞显微镜进行观察。

5.2细胞计数及细胞活率

按照GB/T42076.1-2022的方法检测。

5.3染色体核型

按照《中华人民共和国药典》检测。

5.4细胞表型

按照附录B的方法检测。

5.5三系分化

5.5.1成骨分化

4

按照附录C的方法检测。

5.5.2成软骨骨分化

按照附录D的方法检测。

5.5.3成脂分化

按照附录E的方法检测。

5.6成瘤