人教版教学课件基因工程-大庆市比赛课件.pptVIP

来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的4000种。注：限制性酶是一大类酶，不是一种酶。限制酶大多可以专一性识别双链DNA分子上的某种特定核苷酸序列，限制酶所识别的序列，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线粘质沙雷氏杆菌被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。1.1DNA重组技术的基本工具基因工程基因工程又叫做DNA重组技术，或基因拼接技术。是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的新的生物类型和生物产品。对基因工程概念的理解：基因工程别名：操作对象：操作环境：原理：操作水平：目的：DNA重组技术或基因拼接技术体外基因重组DNA分子水平基因定向地改造生物的遗传特性1、限制性核酸内切酶----“分子手术刀”主要来自原核生物来源：特点：表现在两个方面:识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列,在特定核苷酸序列中的具有特定的切割位点。这体现了限制酶具有专一性作用切割DNA分子（DNA链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开）GAATTCCTTAAGCCCGGGGGGCCCEcoRⅠ（4）作用结果：产生黏性末端和平末端SmaⅠEcoRⅠ黏性末端黏性末端SmaⅠ平末端平末端限制酶存在于原核细胞中的作用是什么？为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？思考?要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……EcoRⅠ……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……不同来源的DNA片段混合将不同种来源的DNA片段连接起来生物A基因片段生物B基因片段……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……酶切2、DNA连接酶——“分子缝合针”催化磷酸二酯键形成，连接DNA片段把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来（1）作用:可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键T4DNA连接酶（2）类型：类型E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源功能大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率较低)相同点差别寻根问底DNA聚合酶DNA连接酶区别相同点DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么?只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键催化形成磷酸二酯键在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键3、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”（1）运载体种类：质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒等(2)运载体须具备的条件：质粒结构简单，大小适中能自我复制并在受体细胞中稳定存在有一个或多个限制酶切点有特殊的标记基因注意：真正用作运载体的质粒都是人工改造过的。小结基因工程的工具限制酶主要存在于原核生物中具有专一性(识别序列)切开DNA分子的磷酸二酯键DNA连接酶连接磷酸二酯键种类E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶运载工具具备的条件结构简单,大小适中能在宿主细胞中自我复制并稳定存在具一个多个限制酶切位点具标记基因质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的4000种。注：限制性酶是一大类酶，不是一种酶。限制酶大多可以专一性识别双链DNA分子上的某种特定核苷酸序列，限制酶所识别的序列，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以