DB51T 1362-2011 黄瓜绿斑驳花叶病毒检验鉴定技术方法酶联免疫吸附测定法　　.docxVIP

ICS65.020.01

B16

DB51

四川省地方标准

DB51/T1362—2011

黄瓜绿斑驳花叶病毒检验鉴定技术方法酶联免疫吸附测定法

2011-12-28发布2012-03-01实施

四川省质量技术监督局发布

I

DB51/T1362—2011

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3原理 1

4试剂与材料 1

5仪器及用具 2

6检测样品的取样及制备 2

7实验室检验 3

8结果判定与记录 3

9样品保存 3

附录A(资料性附录)黄瓜绿斑驳花叶病毒基本信息 4

附录B(规范性附录)黄瓜绿斑驳花叶病毒酶联免疫吸附测定法检验程序 5

II

DB51/T1362—2011

前言

本标准附录A为资料性附录、附录B为规范性附录。本标准由四川省农业厅提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局。

本标准起草单位：四川省农业厅植物检疫站，成都市植物检疫站，绵阳市植保植检站，江油市植保植检站，彭州市植保植检站。

本标准主要起草人：万佳、宁红、谭家兴、谢成伦、蒋辉、李耄、严群、刘如东、刘晓明、徐晖、黄玲、熊玉兰。

1

DB51/T1362—2011

黄瓜绿斑驳花叶病毒检验鉴定技术方法酶联免疫吸附测定法

1范围

本标准规定了黄瓜绿斑驳花叶病毒的检验鉴定方法。

本标准适用于葫芦科作物的黄瓜绿斑驳花叶病毒检验鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB15569-2009农业植物调运检疫规程

SN/T2344-2009黄瓜绿斑驳花叶病毒检疫鉴定方法

3原理

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumbergreenmottlemosaicvirus,CGMMV)寄主广泛，危害严重，是一种通过种子远距离传播的病毒性病害。由于CGMMV的粒体形态、大小等特性很难与同类病毒相区分，症状多样并常有隐症现象。采用酶联免疫吸附测定法，通过CGMMV病毒蛋白抗原决定簇与相应抗体的特异性结合，快速进行黄瓜绿斑驳花叶病毒检验鉴定。

4试剂与材料

除非另有说明，在本标准中仅使用确认的分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。

——包被抗体(Coatingantibody)黄瓜绿斑驳花叶病毒抗体，抗体稀释度按市售产品要求进行。

贮藏于4℃备用。

——酶标抗体(Antibody-enzymeconjugate)用碱性磷酸酶标记的黄瓜绿斑驳花叶病毒的免疫球蛋白抗体。按市售产品要求进行稀释，贮藏于4℃备用。

——包被缓冲液(Coatingbuffer)取2.93g碳酸氢钠(NaHCOs)、1.59g碳酸钠(Na?COs),用1000mL蒸馏水溶解，pH值为9.6,贮藏于4℃备用。

——PBST洗涤液(PBSTBuffer)取1.15g无水磷酸氢二钠(NaHPO?)、0.2g氯化钾(KC1)、0.2

g无水磷酸二氢钾(KH?PO?)、8.0g氯化钠(NaCl)、0.5ml吐温-20,用1000mL蒸馏水溶解，pH值为7.2。

——样品提取缓冲液(Generalextractionbuffer)取20g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、2.0g蛋清蛋白、1.3g无水亚硫酸钠(Na?SO?)、0.2g叠氮化钠(NaN?)、0.5ml吐温-20、8g氯化钠、0.2g磷酸二氢钠、1.15g磷酸氢二钠、0.2g氯化钾，用1000mL蒸馏水溶解，贮藏于4℃备用。

——共轭物缓冲液(Conjugatebuffer)取0.2g牛血清白蛋白，用100mlPBST缓冲液溶解，贮

藏于4℃备用。

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DB51/T1362—2011

——底物(pNPP)对硝基苯磷酸二钠

——底物缓冲液(SubstrateBuffer)取0.1g氯化镁(MgCl?)、90.39g