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第45卷分析化学(FENXIHUAXUE)摇评述与进展第12期

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2017年12月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1766~1775

DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.171201

生物纳米孔道技术在非基因测序方面的研究与应用

杨洁摇李爽摇武雪原摇龙亿涛*

(华东理工大学化学与分子工程学院,结构可控先进功能材料及其制备教育部重点实验室,上海200237)

摘摇要摇纳米孔道分析技术是一种低成本、快速、无需标记的单分子检测技术,仅有20多年的发展历史,在

DNA单分子测序领域展示出较好的应用前景,现已有商业化的产品面世且趋于成熟。越来越多的研究表明,

纳米孔可作为一个通用的单分子传感器。本文综述了生物纳米孔道分析技术对蛋白质、多肽和核酸等单个分

子与孔道间相互作用、动力学和热力学过程的实时监测以及多种生物大分子和金属离子的定量检测等方面

的研究进展。在纳米孔技术中,电化学检测系统也十分重要,本文还特别介绍了高带宽及超低电流分辨仪器

和相关软件的相关进展。

关键词摇纳米孔道;单分子检测;电化学分析;超低电流放大器;评述

1摇引言

纳米孔道分析技术是一种有效的单分子检测手段,1996年,研究人员首次成功地将琢鄄溶血素蛋白

[1]

质纳米孔用于核酸分子的检测,并开启了纳米孔研究的热潮。纳米孔直径特别小,仅允许单个核苷

酸分子通过,因此,可以在此基础上使用多种方法进行高通量检测。由于其无需荧光标记、无需扩增等

优点,生物纳米孔在测序领域展现出良好前景,目前已有商品化便携式测序产品面世并趋于成熟。而纳

米孔道分析技术已不仅局限在测序领域,越来越多的研究表明,纳米孔可作为一种通用的单分子传感

器。根据分子在穿过纳米孔道时产生的特征性阻断电流信号,可实时获取待测物分子的尺寸、电荷、质

量和构象以及与其它分子相互作用的动力学信息。相比于其它单分子分析方法,如原子力显微镜、光镊

等,纳米孔可在无需表面固定,扩增和标记的条件下实现对单个生物大分子的检测。多种生物膜蛋白,

[2,3][4][5][6][7][8][9][10]

包括MspA、phi29、ClyA、FhuA、lysenin、CsgG、SP1和Aerolysin,已被证明可以作为

生物纳米孔道而进行生物大分子的灵敏检测,特别是Aerolysin展现出对短链寡聚核苷酸的超灵敏分辨

[11~15][16~19][20][21]

能力。随着微加工技术的迅速发展,研究人员以氮化硅、二氧化钛、氧化铝、石墨

[22,23][24][25][26]

烯等为材料,通过离子束雕刻、电子束钻孔法或原子层沉积法成功制造了固体纳米孔。

[27][28,29]

固态孔由于具有稳定性强、尺寸可控、易于修饰等优点,近年来得到广泛关注,已有相关文献综

述[30,31],在此不深入讨论。在纳米孔技术中,仪器的发展也十分重要,为了能够更加准确地获取检测信

息,需要提高纳米孔测量系统的时间及电流分辨率,研究者近年开发了适用于纳米孔道单分子检测的电

[32]

化学检测系统,成功