人教版教学课件课题3血红蛋白的提取和鉴定.pptVIP

每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。课题3血红蛋白的提取和分离专题5DNA和蛋白质技术、分离生物大分子的基本思路是什么？AEBDC、不同蛋白质的特性在哪些方面存在差异？、本课题我们将利用血红蛋白与杂质蛋白哪方面的差异进行提纯？、为什么不用鸡的血红细胞而用人的血红细胞作为实验材料？、用什么方法分离相对分子质量不同的蛋白质？学生活动1:一、基础知识:凝胶色谱法1、什么是凝胶？㈠凝胶色谱法（分配色谱法）：什么是凝胶色谱法？ACB凝胶色谱法的原理是什么？请用自己的话总结出凝胶色谱法分离相对分子质量不同蛋白质的具体过程。学生活动2:缓冲液的作用是什么？01缓冲液是如何配置的？你所学过的人体血液的缓冲液有哪些？02本实验加的是什么缓冲液？为何要加缓冲液？03缓冲溶液04、什么是缓冲液？学生活动3:0501、什么是电泳？02影响电泳迁移速度的因素有哪些？03电泳分离各种分子的原理是什么？04如何消除电荷对电泳迁移速度的影响？05、请描述电泳的过程？学生活动4:（三）、电泳电泳检测结果琼脂糖凝胶电泳样品处理：包括洗涤红细胞；血红蛋白稀释；离心等操作收集到的血红蛋白溶液。纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。粗分离：透析除去分子较小的杂质。纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。蛋白质的提取和分离一般分为四步：二、实验操作（一）样品处理红细胞的洗涤：目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；用生理盐水洗涤。血红蛋白的释放：在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放分离血红蛋白溶液：离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。透析：装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（PH为7.0）透析。透析过程（二）凝胶色谱操作（1）凝胶色谱柱的制作：①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。②底塞的制作：打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端。注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。③顶塞的制作：打孔→安装玻璃管。④组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体。⑤安装其他附属结构。凝胶的选择：A、材料：交联葡聚糖凝胶（G-75）。B、代表意义：“G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围。75表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5克。凝胶的前处理：配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于蒸馏水或洗脱液中充分溶胀后，配成凝胶悬浮液。凝胶色谱柱的装填方法：A、固定：将色谱柱装置固定在支架上。B、装填：将凝胶悬浮液一次性的装填入色谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。注意：1、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。2、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。（2）凝胶色谱柱的装填