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mRNA新冠疫苗的工艺设计

摘要：介绍了mRNA新冠疫苗的工艺设计特点，并结合mRNA新冠疫苗生产的

无菌要求，探讨了公用工程的设计要点。

关键词：mRNA疫苗；工艺设计；公用工程设计

随着新冠疫情的爆发，急需一种有效的疫苗来控制新冠病毒在全球的流行。

目前新冠疫苗研发的主要技术路径，包括减毒活疫苗、灭活疫苗、腺病毒载体疫

苗、重组蛋白疫苗、核酸疫苗等。其中核酸疫苗包括DNA疫苗和mRNA疫苗，是

极具潜力的新一代疫苗研发技术。

减毒活疫苗的免疫效果好，生产成本低。但由于研发周期长，制备过程较复

杂，生产存在较高病毒暴露风险，产品的安全性评价较为困难，因此减毒疫苗在

新冠疫苗的研发中被限制。灭活疫苗的生产技术相对成熟，安全性比较高。但单

剂次接种免疫原性弱，免疫效果会随接种时间的延长而逐渐减弱，需要增加接种

剂次以维持免疫效果。腺病毒载体疫苗免疫效力较强，给药方便，但是抗原靶点

单一，如何克服“预存免疫”是一个难题。重组蛋白疫苗如何保证免疫原性是需

要关注的问题，免疫原性取决于自身特性，存在个体表达的差异性，从而影响免

疫原性。

mRNA疫苗是把在体外合成的含有编码抗原蛋白的mRNA直接送入人体细胞，

并以此为模板翻译形成抗原蛋白，从而激发人体的免疫反应。目前大多是采用脂

质纳米粒作为载体，将mRNA高效地导人进细胞中。

1、mRNA新冠疫苗的工艺设计

1.1原液生产工艺

原液生产的工艺流程包括质粒制备、线性化、mRNA转录、脂质体包裹四个阶

段，根据工艺过程不同阶段特性和生产工序的特点，生产车间主要包括种子扩增、

配液、发酵、收获、裂解、澄清过滤、粗纯、精纯、无菌过滤等功能房间，以及

相关配套公用工程区域。

（1）质粒制备

将质粒注入已进行了人工调整的大肠杆菌里，将携带了质粒的大肠杆菌在培

养基中生长繁殖。在生物反应器中进行发酵，发酵完成后，注入化学物质分解大

肠杆菌的细胞壁，经过离心、裂解和澄清过滤得到目标质粒。

此区域主要设置培养间、发酵间、收获间、纯化间、配液间等生产房间，同

时配备相应的灭菌间、人物流通道、洁具间等辅助房间。

（2）线性化

被提取出来的质粒经质量检测后，进入线性化系统，加入酵素进行环状质粒

切割，把病毒基因从环状状态切割成直线段。

经过层析、超滤、除菌过滤等工序，将混合物进行纯化，过滤出残留的细菌

或质粒片段。

此工序可以和质粒纯化共用一个房间，也可单独设置房间，也可与mRNA转

录在同一区域。

（3）mRNA转录

在IVT反应系统内，利用核酸内切酶将DNA转化为mRNA。得到的混合物经过

层析、超滤去除杂质。

IVT反应和层析超滤可以分开房间，也可以在同一个房间操作。

（4）脂质体包裹

脂质纳米粒能保护mRNA进入人体细胞时不会被破坏。

将混合纸质工作液解冻过滤，与配制好的mRNA工作液混合包封，将他们混

合成脂质纳米粒。

此阶段涉及乙醇的使用，需要考虑防爆设计。

（5）清洗灭菌区

集中设置清洗灭菌区不仅节省了清洗灭菌区的面积，还有利于生产管理。清

洗灭菌区一般布置在中心位置，为整个生产区服务，设置独立的人物流出入口。

清洗灭菌区主要设置粗洗间、精洗间、灭菌间、灭后间、洁净物品包装间、洗衣

间等。可以方便接收需清洗的无菌器具，同时清洗灭菌后的器具也很容易再送回

生产区域。

1.2制剂生产工艺

将上游所制备的原液与除菌过滤后的稳定剂按比例混合制备成半成品。再在

灌装区进行灌装，经过压塞、轧盖，得到产品。对上述得到的产品进行灯检，剔

除不合格品。对灯检合格的产品贴标签。经过包装线打包，进入待验区。根据产

品的质量标准，对产品进行抽样检验，检验合格后放行入库。

根据新版GMP对风险控制的要求，制剂生产区应设置单独的人物流入口，必

要时应设计人员退出通道。考虑到轧盖过程中可能有铝屑产生，从而增加对制品

的污染风险，因此在设计时将轧盖操作区与灌装区严格分开，轧盖区相对灌装区

呈负压，轧盖人员设置单独更衣间，西林瓶由灌装至轧盖的全程由A级送风进行

环境保护。

2、公用工程设计特点

2.1压差要求

无毒区房间的压力要高于同级别下有毒区房间的压力，有毒区与无毒区之间

的缓冲间相对两个相邻房间的压力为正压，以切断两个区域之间的气流，防止交

叉污染。强毒生产区从缓冲间到走