生物化学与基础分子生物学实验.pdfVIP

吾日三省乎吾身。为人谋而不忠乎?与朋友交而不信乎?传不习乎?——《论语》

生物化学与基础分子生物学实验

本实验旨在增进学生对于生物化学与基础分子生物学知识的理

解，同时也希望借此机会增强学生的实验动手能力和实验数据

分析能力。本实验主要分为两部分，第一部分是生物化学实验，

主要包括蛋白质的提取、纯化和酶促反应的研究。第二部分是

基础分子生物学实验，主要涉及DNA的提取、PCR扩增和凝

胶电泳检测等。

一、生物化学实验

1.蛋白质的提取

蛋白质的提取是研究蛋白质功能和结构的基础。常用的蛋白质

提取方法有机械破碎法、化学破碎法和生物学破碎法等。本实

验以细胞生物学破碎法为主要方法，即利用超声波或手工研磨

等方法将细胞破碎。其中，手工研磨可以选择石英砂或三氧化

二铬等研磨介质。破碎过程中需加入适量浓度等渗液和抑制剂，

以防止蛋白质的降解和氧化。

2.蛋白质的纯化

蛋白质的纯化是进一步研究蛋白质结构和功能的关键。常用的

蛋白质纯化方法包括离子交换、凝胶过滤、透析、亲和层析和

电泳等方法。本实验以离子交换和凝胶过滤为主要方法。其中，

离子交换可利用正离子交换和负离子交换两种模式进行，考虑

到蛋白质电荷状态的不同以及离子交换树脂的不同选择，从而

使得目标蛋白质与其它蛋白质的区分度大大增加。凝胶过滤则

吾日三省乎吾身。为人谋而不忠乎?与朋友交而不信乎?传不习乎?——《论语》

利用凝胶的孔径大小进行分离纯化。

3.酶促反应的研究

酶促反应是生物化学研究的重要组成部分，可以研究酶的特性、

动力学以及酶对于特定底物和抑制剂的亲和性等。本实验选择

酶促细胞色素C氧化为模型反应。反应中需要考虑诸多因素，

如温度、pH、反应时间等，同时还需考虑反应体系中酶、底

物和抑制剂的摩尔比例关系。

二、基础分子生物学实验

1.DNA的提取

DNA的提取是基础分子生物学实验的关键步骤，其目的是提

高纯度和量。常用的DNA提取方法有化学法、机械法、热平

衡法和离心法等。本实验以盐酸摇法为主要方法进行DNA的

提取。其中将细胞经过适当处理后加入盐酸和β-己糖苷酯，

在恒温和摇动条件下分离得到DNA。

2.PCR扩增

PCR是分子生物学中的核心技术之一，是一种复合酶链反应。

PCR可以扩增特定的DNA片段，目的在于使得DNA片段的

数量扩大，便于后续实验的操作和研究。PCR反应中关键的

因素包括模板DNA、引物、dNTPs、酶等。本实验中有两个

PCR反应，一个是检测p53基因突变，需要选择特定的引物

和PCR工艺条件；另一个是检测内参基因GAPDH，它是许

吾日三省乎吾身。为人谋而不忠乎?与朋友交而不信乎?传不习乎?——《论语》

多生物学实验中内参的典型基因。

3.凝胶电泳检测

凝胶电泳是分子生物学实验中的常用技术，其目的是根据

DNA的大小来分离DNA，从而实现对于PCR扩增产物的检

测。本实验中需要通过凝胶电泳来检测p53基因突变和

GAPDH基因的扩增产物。根据产物大小对于其进行定位并进

行观察和检测。

综上所述，本实验是一次综合性的生物化学与基础分子生物学

实验，在蛋白质结构与功能、DNA分子的提取扩增和检测等

方面起到了重要的作用。需要注意的是，在实验过程中需严格

掌控实验条件，同时对于实验数据的处理与分析也需认真负责，

以确保实验结论的准确性和科学性。四