原创力文档- 1、本文档共8页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
博观而约取，厚积而薄发。——苏轼
单克隆抗体CHO细胞株筛选策略探讨（一）
作者lFrankTao
编辑l细胞房间
摘要：随着单克隆抗体技术发展，单克隆CHO细胞株筛选技术也
日异月新，越来越高效，越来越智能化。本文主要结合自身CHO细胞
株开发和细胞培养经验，将目前国内外单克隆抗体CHO细胞株筛选技
术进行总结，供行业内参考，促进行业健康发展；
问题：如何4-6个月内，筛选到稳定的单克隆细胞株表达在3-5
g/L或以上？
关键词：单克隆抗体；CHO细胞；ClonePix；单克隆影像学拍照；
Beacon；
1.宿主细胞
抗体药物生产的宿主细胞主要NS0、HEK293、Hybridoma、
SP2/0、CHO等，但CHO细胞是生产抗体药物应用最广的宿主细胞，
CHO细胞类型也比较多，例如：DG44、DXB11、CHOK1、CHO-S
等。上世纪八九十年代开始，工业上使用较早的是DHFR体系（二氢
叶酸还原酶缺陷型）DG44细胞。当细胞培养基内还有MTX（甲氨蝶
呤）时，二氢叶酸还原酶被抑制，通过反馈调节，使得该基因自我扩
增，连带齐上下100-1000kb的基因都会扩增，如此目的基因也得到
扩增，即可以提高目的蛋白的表达量。现在很多单抗生产的体系依然
是DG44。
GS体系（谷氨酰胺合成酶）CHO-K1是近些年发展的一种基因扩
增筛选系统，较DHFR系统有明显的优越性，目前在国际上得到了广
泛地认可。其原理是GS在ATP水解提供能量的同时，利用细胞内的
博观而约取，厚积而薄发。——苏轼
氨和谷氨酸合成谷氨酰胺。在缺乏外源的谷氨酰胺培养基中加入GS抑
制剂甲硫氨酸亚砜亚铵（MSX），可使GS基因及与之相连的目的基
因得到有效扩增，从而达到提高目的基因表达水平的目的。该系统的
优点主要在：该系统不需要基因缺陷型的CHO-K1细胞株做为宿主细
胞；CHO-K1细胞易于培养，更强壮；在培养基中无需加谷氨酰胺，
能够避免谷氨酰胺分解造成培养体系中氨水平高的问题，降低了工艺
控制的难度，并且可有效提高细胞发酵密度和延长细胞生存时间。
当然，目前也有商业化的GS缺陷性CHO细胞，主要有lonza公
司的CHOK1SV（2002年）和CHOK1SVGS-KO（2012年），Merk
公司（原SAFC）的CHOZNCHOK1（2006年），采用缺陷的GS体
系筛选可以缩短单克隆筛选周期，但由于供应商收费昂贵，国内外很
多公司依然选择ATCC原始的CHOK1宿主细胞。
2.筛选标记以及表达载体选择
表-1哺乳动物细胞表达载体中常用的筛选标记
Table-1Selectablemarkersoftenusedinmammalian
expression
文档评论（0）