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自家组织灭活苗制作

鸡组织苗的制作

用具及其消毒:手术剪/镊子、饭盒、三角瓶、量杯、纱布等高压消

毒。

捣碎机:用温和消毒水浸4-5小时(浓度为正常浓度的2倍)之后用

温开水冲洗掉消毒药。

1.采病料:发病死亡鸡的典型脏器，肝、脾、肺、肾、法氏囊、输

卵管等典型病变脏器，也可从不同的鸡采取(结合猪的典型病料提取)。

将组织的结缔组织去除。放在冰箱或冰柜冷冻室反复冻融，冰冻后拿

出融化，升至常温再放冰箱冷冻，反复操作最少三次。这样做的目底

是让病毒从内脏组织病料中最大程度的释放。(也可借此机会逐渐切碎)

2.称重:将采取的组织称重，一般按W:V比加入1:3或1:5的生理盐水

稀释，即300克组织加入1000或1500毫升生理盐水。

3.粉碎:用组织粉碎机粉碎组织，越碎越好，制成组织悬液。

4.过滤:先用2层灭菌纱布粗过滤，边过滤边搅拌组织悬液;滤液再

用8层灭菌纱布精过滤;最好用12层纱布过滤。5.配制1%~2%的甲

醛灭活液:99%以上纯的甲醛用灭菌生理盐水配制成1%(或2%)，如果

是福尔马林，2.78毫升相当于1毫升甲醛，如配制1000毫升1%的甲

醛灭活液需加入27.8毫升。

6.灭活:将甲醛溶液加入滤液中，使甲醛的终浓度为0.1-0.3-0.5%。

在37?(30~40?之间也可)灭活48~72小时，每2小时振摇一次，以充

分灭活。

7.进行安全性检测。

无菌检查:取灭活的组织液0.2ml，各接种血琼脂斜面及肉汤培养

基，37培养24--48小时，观察无菌生长;安全检查:选择1.5Kg以上

健康兔4只，分两组，每组两只，试验组皮下接种灭活组织液5ml/只，

对照组接种PBS液5ml/只，观察7天，无不良反应则为合格;

效力检验:选择1.5Kg以上健康兔4只，每只肌注1ml，20天后

采集兔的血液并分离血清，进行HI试验，检测血清抗体效价;或取对照

兔2只，连同试验兔一起，用兔瘟强毒进行攻毒，结果对照兔2/2死

亡，试验验兔3/4保护或对照兔1/2死亡，试验兔4/4保护，说明所

制的兔瘟组织灭活疫苗合格。

8.分装:经无菌检查及安全检检合格的灭活液，分装时加入500-

1000万单位/1000毫升抗生素，再加入氢氧化铝胶使其终浓度为20%，

充分混合均匀，分装到灭菌的玻璃瓶中，加盖封好，并贴上标签，4--

8?保存备用。9.使用前在组织疫苗中，每500毫升滤液中加入丁胺卡

那霉素或先锋4号18-20克混匀(或实验过的有效的杀菌药物和高倍使

用浓度)，每只鸡注射0.5-1毫升(大鸡0.5毫升，小鸡0.3毫升)。

防腐:先配成5%生理盐水迭氮钠，然后每100毫升加入1毫升的

5%迭氮钠的防腐，迭氮钠终浓度为0.05%。

猪组织灭活苗制作

材料:症状典型的病猪的淋巴结,肺,脾

药品:分析纯甲醛、迭氮钠、生理盐水的浓度为0.9%

器皿:小型搅肉机一台、手术刀、量筒、盆、漏斗、2000毫升量杯、

手术剪、菜刀、菜板、500毫升的窄口瓶。制作过程:1、采集病料。

采集症状典型的病猪的淋巴结,肺,脾。含病毒越多越好。

2、将病料剁碎(除去筋膜气管及较粗的支气管,但一定要取出肺门

淋巴结)，然放入高速搅肉机内搅成肉浆糊。病料组织越剪碎越好，

3、向肉浆糊加入少许的生理盐水，成稀泥状。病料组织与生理盐

水的重量比为1:31:5为好，4、过滤:将上步制成的物分三次过滤，

第一次用一层沙布过滤，第二次用两层沙布过滤，第三次用四层沙布

过滤。(第一次的滤渣丢弃，滤液待用)

5、向滤液加入铝胶生理盐水至所需要制作的量。

6、用适量的生理盐水稀释甲醛和溶解迭氮钠。(甲醛用量占自家

苗量的0.5%，病毒灭活需要的浓度为0.05%,0.4%)需加入大量抗菌素

杀菌(每1000mL加入阿莫西林500mg+氟苯尼考250mg)

7、将