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薄层色谱和柱色谱

薄层色谱和柱色谱

色谱法是分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法,有着极其广泛的用途。

色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性

能即分配的不同,或其它亲和作用性能的差异,使混合物的溶液流经该物质时进

行反复的吸附或分配等作用,从而将各组分分开。流动的混合物溶液称为流动相;

固定的物质称为固定相可以是固体或液体。根据组分在固定相中的作用原理不同,

可分为吸附色谱、分配色谱等。吸附色谱常用氧化铝和硅胶作固定相;分配色谱

中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂,以吸收较大量的液体作固定相,而支持剂

本身不起分离作用。根据操作条件不同,可分为柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气

相色谱及高效液相色谱等类型。

一、薄层色谱

薄层色谱ThinLayerChromatography,TLC属于固-液吸附色谱,是一种

微量的分离分析方法,具有设备简单、速度快、分离效果好、灵敏度高以及能使

用腐蚀性显色剂等优点。适用于小量样品几到几十微克,甚至0.01μg的分离。

同时薄层色谱是一种非常有用的跟踪反应的手段,在进行化学反应时,常利用薄

层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。也常用作柱色谱的先导,

可用于柱色谱分离中展开剂的选择,也可监视柱色谱分离状况和效果。

最常用的薄层色谱属于液-固吸附色谱,把吸附剂如氧化铝、硅胶和粘合剂

如煅石膏CaSO4?H2O、羧甲基纤维素钠等均匀地铺在一块玻璃板上形成薄层,将

分离样品滴加在薄层的一端,当利用毛细作用使流动相沿着吸附剂薄层固定相移

动时,吸附剂借各种分子间力包括范德华力和氢键作用于混合物中各组分,各组

分以不同的作用强度被吸附。被分离组分在固定相与流动相之间进行分配或吸附,

经过反复无数次的分配平衡或吸附平衡,不同组分的极性化合物就会在薄层板上

移动不同的距离。极性强的化合物会“粘”在极性的吸附剂上,在薄板上移动的

距离比较短。而非极性的物质在薄层板上移动较大的距离。化合物移动的距离大

小用Rf值表达,是介于01之间的数值,它的定义为:

如图1所示,d为点样点到溶剂前沿的距离,d1为点样点到斑点1的距

离,d2为点样点到斑点2的距离。

薄层色谱常用的吸附剂或支持剂是硅胶或氧化铝。薄层色谱用的硅胶分为

硅胶H不含粘合剂;硅胶G含煅石膏做粘合剂;硅胶HF-254含荧光物质,可在波长

254nm紫外光下观察荧光;硅胶GF-254含有煅石膏和荧光剂。薄层色谱用的氧化

铝也分为氧化铝G、氧化铝GF254及氧化铝HF254。

薄层色谱技术包括制板、点样、展开、显色等。

1.薄层板的制备

薄层板的薄层应尽可能的均匀而且厚度0.251mm要固定。否则展开时溶剂

前沿不齐,色谱结果也不易重复。

制备薄层板,首先将吸附剂调成糊状:如称取约3g硅胶G,加入到67mL

0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液中,调成均匀的糊状物可铺78张载玻片。这一步一

定要将吸附剂逐渐加入到溶剂中,边加边搅拌;如果把溶剂加到吸附剂中,容易产

生结块。然后采用简单的平铺法和倾斜法将糊状物涂布在干净的载玻片上,制成

薄层板。

1平铺法:可将自制涂布器如图2,洗净,把干净的载玻片在涂布器中摆好,

上下两边各夹一块比载玻片厚0.25mm的玻璃板,在涂布器槽中倒人糊状物,将徐

布器自左向右推,即可将糊状物均匀地涂在玻璃板上。

2倾斜法:如没有涂布器,则可将调好的糊状物倒在载玻片上,用药匙摊开

后,用手摇晃并轻轻敲击玻板背面,使其糊状物均匀铺开且表面均匀光滑。

图2薄层板涂布器

涂好的薄层板室温水平放置晾干后,放入烘箱内加热活化,活化条件根据

需要而定。硅胶板一般在烘箱中渐渐升温,维持105110℃活化30min。氧化铝板

在200220℃烘4h可得活性Ⅱ级的薄板。150160℃烘4h可得活性ⅢⅣ级的薄板。

薄层板的活性与含水量有关,其活性随含水量的增加而下降。注意硅胶板活化时

温度不能过高,否则硅醇基会相互脱水而失活。活化后的薄层应放在干燥器内保

存。