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老当益壮，宁移白首之心；穷且益坚，不坠青云之志。——唐·王勃

PCR在临床检验中的应用

医学检验大致可分为形态学、生物化学、血清免疫学和分子生物学几大类，其分别代表几代

实验诊断技术。60年代DNA双螺旋结构及半保留复制模式的出现，70年代基因重组及体

外基因克隆技术、分子杂交技术的应用使分子生物学在疾病诊断中得到了长足的发展。特别

是1985年Mullis发明了聚合酶链式反应（PCR）技术，使医学界真正兴起了基因诊断技术

热，成为现代医学发展的又一里程碑。用于临床检验的PCR技术与经典的PCR反应在操作

上稍有区别，有其自己的特色。一般在样品处理上，多采用非离子去污剂一次加热处理，这

种方法对DNA纯化有限，但适应临床微量、快速的特点。另外PCR反应体系中各组成成

份往往都预分装到反应管中，既减少操作者的工作强度而且也减少了污染的机会，具有极高

的使用价值。本公司率先研制并推出单管单人份的PCR诊断试剂，具有开创性意义。这些

改进都不影响PCR效果，同样表现出高特异性、高敏感性、简便快捷等PCR最优秀的特征，

在常见传染病、性病、肿瘤、遗传病、寄生虫病、优生优育、法医学等广泛领域中有相当高

的实际应用价值。

常见的传染性疾病有细菌、病毒、衣原体、支原体等，可引起消化、呼吸、循环、泌尿生殖

等不同系统相应的病变。消化系统感染性疾病在我国具有代表性意义的有肝炎、胃炎及肠道

感染性疾病。引起肝炎的病原体主要包括乙型肝炎病毒（乙肝）、丙型肝炎病毒（丙肝），

其它还有甲型肝炎病毒（甲肝）、丁型肝炎病毒（丁肝）、戊型肝炎病毒（戊肝）、庚型肝

炎病毒（庚肝）等。这几种肝炎病毒中只有乙型肝炎病毒是DNA病毒，其余均为RNA病

毒。我国是乙肝高发区，乙肝病人为世界乙肝病人总数的50％。乙肝病毒经血液传播，病

毒主要在肝细胞中增殖，也可以长期存留在骨髓细胞或外周血白细胞中。通常用PCR法检

测血清中的乙肝病毒。有报道用PCR法可以在泪液、乳汁、精液及血白细胞中检出乙肝病

毒，这些发现提示其它传染途经存在的可能。PCR法检测乙肝的优势表现在：①早期诊

断，因为PCR扩增极其敏感，理论上可检出100CID/ml乙肝病毒的患者血清，在感染潜伏

期即可被PCR法检出。②对低持续感染乙肝病人的诊断，有些乙肝病人体内的病毒长期

低复制感染，血清病毒浓度极低，一般酶标试剂无法检出，可以用PCR法检出。③疗效

跟踪及病程判断，因为PCR能半定量检测乙肝病毒基因，是病毒是否存在及其数量多少的

最直接指标。在治疗过程中通过监测血清或白细胞中病毒基因存在与否及其动态变化即能准

确地了解病情。丙型肝炎病毒在血清中的浓度很低，丙肝病毒的分离尚未成功。目前用于丙

肝病毒检验的方法主要是ELISA法测定血清中的HCV抗体。由于HCV尚无法分离纯化，

所以用于包被的抗原是人工合成肽或基因工程蛋白，这些人工抗原与天然病毒抗原有一定的

区别，理论上是存在假阳性或假阴性。同时血清中抗体的出现及动态变化与病人病情无线性

相关关系。RT－PCR技术使这些困难得到解决。HCV是RNA病毒，需先将病毒RNA逆转

录为cDNA（RT）后再进行PCR扩增，这种技术称之为逆转录－PCR（RT－PCR）。PCR

敏感性高可以检测出血清中低浓度的病毒，了解病毒在体内复制的动态状况。RNA纯化要

求严格，是RT－PCR的技术关键，本公司目前使用的高效基因释放剂，联合特异性固相基

因吸附乳胶颗粒，对样本中的RNA进行分离纯化，使这一问题得到解决。通常用于RNA

→cDNA逆转录的酶大致可以分为二大类，即低逆转录酶，如AMV/MLV逆转录酶，高逆