2025年微生物菌群密度检测研究报告.docxVIP

云阳金谷农业发展有限公司检查汇报

试验名称：菌落总数的检查试验措施：平板计数法

商品名称：夸夸唔、有友、奇爽、乐棒棒、香猪脆、香脆肚。

参照原则：GB4789-17总负责人：熊经理

检查人员：徐恒琴、崔艳霞、游惠检查时间：7月26—8月6号

8月8日

菌落总数的检测平板计数法

一、试验目的

为了深入理解与熟悉我们产品的操作规范和要点的控制，掌握菌落总数的检查措施和理解超净工作台的操作规范。

二、试验仪器设备和所需试剂及试剂的配制。

1、试验仪器及设备

杀菌锅YXQ—LS—SU编号5090、无菌超净工作台SW—CJ—IC编号24、JJ-Z型组织捣碎机、隔水或智能恒温培养箱GHP—9080、出厂编号13475、烘箱ZFD—5040(全自动型鼓风干燥箱)、蒸馏水制备机、灭菌过的250ml锥形瓶、1ml吸量管、10ml的吸量管、酒精灯、锥形瓶1000ml、培养皿、电子天平AL104、电磁炉、锅、锅铲、PH试纸、恒温水浴锅HH—4出厂标号160.53。

2、试验试剂及配制

2.1重要试剂：琼脂、无菌生理盐水、无菌水、75%的酒精、1moL/L氢氧化钠、1moL/L的盐酸。

2.2药物试剂

2.21琼脂：精确称取12.5g胰蛋白胨、酵母浸膏7.5g、葡萄糖3.0g、琼脂37.5g、蒸馏水2500ml,加入至锅中煮沸溶解，先加入琼脂将其熬化，在加入其他样品，直至样品熬化即可关掉火，冷却后调解PH值(7.0左右即可)。酸性用氢氧化钠调整、碱性用盐酸进行调整，将在120℃高压灭菌15min即可。

2.22无菌生理盐水：精确称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中。

2.23无菌水：吸取1000ml的蒸馏水，将在120℃高压灭菌15min即可。

2.241moL/L氢氧化钠：称取40g的氢氧化钠溶于1000ml的蒸馏水中在

120℃高压灭菌15min即可。

2.4575%的酒精：分别吸取400ml的95%的无水乙醇和100ml的蒸馏水与500ml的容量瓶中。

2.461moL/LDE盐酸：移取浓盐酸90ml,用蒸馏水稀释至1000ml,在120℃

高压灭菌15min即可。三.试验环节

1、样品的稀释

1.1固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min,或放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1:10的样品匀液。

1.2液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置合适数量的无菌玻璃珠)中，充足混匀，制成1:10的样品匀液。36℃±1℃48h±2h.

2、检样与接种：25g(ml)样品+225ml稀释液，均质，10倍系列稀释选择2个～3个合适稀释度的样品匀液，各取1ml分别加入无菌培养皿内。

2.1用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及

稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。

2.2.按上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管或吸头。

12.2.根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个合适稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时，吸取1ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同步，分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

3、倒平板：在酒精灯开着的条件下进行到培养皿的3分之一即可，而其中琼脂的温度需要在46℃即可倒入琼脂，否则会影响其细菌的生长繁殖。平板计数琼脂培养基，混匀.

4、培养：待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。假如样品中也许具有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约

4ml),凝固后翻转平板，

5、报告

6.菌落计数

可用肉眼观测，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和对应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表达。

6.1选用菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录详细菌落数，不小于300CFU的

可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。