层析分离方法.pdfVIP

非淡泊无以明志，非宁静无以致远。——诸葛亮

层析分离方法

概述

■层析法――是一种使不同分子相互分离的过程，当一混合样品被导入一固定相的支持体

中，而另一流体(移动相)通过时，由于样品各组分与固定相和移动相相互作用的大小不同，

使各组分通过固定相支持体的速率不同而得分离。

层析法的特点：能分离一系列结构较为相似的成分，以达到一般分离方法难以达到的

目的。

■层析常见种类及用途:

a.柱层析――分离量较大，主要用于分离制备；

b.薄层层析――主要用于分析鉴定,也可用于半微量制备。

c.纸层析――主要用于分析鉴定，也可用于半微量制备。

■层析法按分离原理大体上又可以分为

(1)吸附层析(利用吸附能力的差别进行分离)，常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等；

(2)分配层析(利用在二种不互溶的溶剂中分配比不同进行分离)，常用的支持剂为硅胶、

硅藻土、纤维粉等，反相硅胶(键合硅胶)、液滴逆流层析则是分配层析与逆流分溶的发

展；

(3)离子交换层析(利用离子解离强度不同进行分离)，常用的离子交换树脂有强酸性(磺

酸型)、强碱性(季胺型)、弱酸性(羧酸型)、弱碱性(三级胺型)；

(4)电泳(利用电流通过时，离子趋电性不同进行分离)，常用的有纸电泳、琼脂电泳、凝

胶电泳。

(5)其他有气体层析、凝胶层析、亲和层析等，

■层析方法的选择：

(1)非极性的成分常选择氧化铝或硅胶吸附层析；

(2)极性较大则采用分配层析或弱吸附剂吸附层析；

(3)酸性、两性成分可用离子交换层析，有时也可用吸附层析及分配层析。

■各类化合物适宜的层析方法：

a.一般生物碱的分离可用硅胶或氧化铝层析，对极性较高的生物碱也可用分配层析，而

对季胺型水溶性生物碱也可用分配层析或离子交换层析。

b.甙类的层析分离往往决定于甙元的性质，如皂甙、强心甙，一般可用分配层析或硅胶

吸附层析。

c.芳香油、甾体、萜类(结合成甙除外)包括萜类内酯，往往首选氧化铝及硅胶层析，若

非淡泊无以明志，非宁静无以致远。——诸葛亮

在氧化铝柱上有次级反应，则宜用硅胶吸附层析。

d.黄酮体、单宁等多元酚衍生物可用聚酰胺吸附层析。

e.有机酸、氨基酸一般可选用离子交换层析，有时也用分配层析，有些氨基酸也可用活

性炭吸附层析。

f.多肽、多糖等大分子化合物，常用凝胶层析、亲和层析、反相硅胶（键合硅胶）。

第一部分柱层析

第一章硅胶层析

一、层析用硅胶

层析用硅胶一般以SiO·xHO表示，系多孔性的硅氧环Siloxane(a)交链结构，由于其骨架

22

表面具有很多硅醇Silanol(b)基团，能吸着多量水分，此种水分几乎成游离状态存在，因此当

加热至100℃左右能可逆地被除去。硅胶的活性水分含量有关(见表7-1)，

表7-1氧化铝和硅胶含水量与活性的比较

硅胶加入水量（%）活性氧化铝加入水量（%）

0I0

5II3

15III6

25IV10

38IV15

含水量