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古之立大事者,不惟有超世之才,亦必有坚忍不拔之志。——苏轼

PCR技术及其应用实例和前景

检验0905郭媛媛

PCR是我们研究分子生物学的重要方法和工具,随着医学科技

的不断发展,这种技术越来越被人们看重,越来越多的应用到

我们的科技研究之中,作为医学检验工作者,这种技术也是我

们必须掌握的从这篇文章中让我们了解一下它在实践之中的前景。

[1]

摘要:PCR(ploymersechainreaction)技术,即聚合酶链反应技术,又称基

因体外扩增技术或和核酸体外扩增技术,利用两种与相反链杂交并利用附着于目

标DNA两端的寡核苷酸引物在高温(95°C)使目标DNA片断的DNA双链变性,分

解为单链,在较低温度(37-63°C)与引物退火,然后变温到72°C左右。在耐高

温DNA聚合物酶的作用下引物被沿样板DNA单链延伸合成互补链,然后有变性→

退火→延伸反复进行。引物大大过量,dNTP过量,酶在高温中是较稳定的,这

样经过几十个循环,目标DNA片断就按2的n次方递增,用此法可以从mRNA中,

cDNA库中扩出目标基因。总之,生物体内核酸的复制是半保留复制,PCR技术就

是在体外对此进行复制模拟。

关键词:PCR技术;DNA;应用;工程效益扩大

1引言

人类利用微生物的实践具有悠久的历史,公元前,人类就已经利用天然的微

生物(酶)生产奶酪和酒。进入工业革命时代,人们开始对天然微生物进行筛选

和诱变,生产某些简单的代谢产物,氨基酸,维生素和抗生素。

20世纪60年代至今,随着人类虽微生物认识的加深,DNA重组技术的出现,

发酵技术的提高:更多的微生物可产生各种各样的抗生素,应用于医学微生物学

(MedicalMicrobiology)中;更多微生物被发现可产生促生物质,有利于人和动

植物的生长,对农业科学(Agriculture)有着极重要的支持;还有些微生物的代

谢产物是重要的化工原料,加速了化工产业(ChemicalIndustry)的完善;再有

些微生物被广泛应用于法医鉴定(Forenic)、医学(MedicalScience)、环境监测

(EnvironmentSupervise)分子克隆(MemberClone)、序列分析(Alignment

Analysis)、考古研究(ArchaeologySearch)等重要学科,具有广泛的应用前景,

古之立大事者,不惟有超世之才,亦必有坚忍不拔之志。——苏轼

这就是我要介绍的PCR技术。

2PCR技术原理

[2]

下面我通过摘录了一个实验,来介绍一下PCR技术的过程及其原理(至于

它详细的实验过程和方法详见参考文献)。.

在94°C高温下双链变性,分离出DNA单链的模板,然后降温(55°C),然

添加的与DNA单链配对,紧接着温度升高(72°C),在DNA聚合酶的作用下,脱

氧核苷三磷酸开始渗入,并从引物的结合端开始,按5ˊ-3ˊ方向延伸,合成出

新生的DNA互补链,这一过程称为一循环,然后重复该循环,模板DNA被大量复

制。

在此,我要特别强调几点注意事项

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