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利用重组酵母菌生产人胰岛素

摘要：利用重组酵母菌生成人胰岛素为以下流程：获得目的基因→构建重组质粒

→构建基因工程菌→工程菌发酵→产物分离纯化→产品检验。其中前三个流程为

产人胰岛素酵母工程菌的构建，根据人胰岛素的氨基酸序列和酵母偏爱的密码

子，采用基因半合成技术合成人胰岛素基因。将合成的胰岛素基因克隆到pPIC9

质粒，构建了毕赤(Pichia)酵母重组表达载体pPINS319，用BglII线性化后用电转

化法导入毕赤酵母GSll5菌株，经过营养筛选和PCR复筛，得到含人胰岛素基因

的毕赤酵母工程菌株。后三个流程为胰岛素的大规模发酵生产，通过补料-分批

发酵获得发酵液，分离纯化后获得人胰岛素。纯化后的重组人胰岛素产品经

SDS检测，氨基酸组成分析及小鼠惊厥实验证明制得产品为有生物活性的

人胰岛素。

关键词：重组酵母；人胰岛素；发酵；纯化；鉴定

Usingrecombinantyeasttoproducehumaninsulin

HuSheng1142043040

Abstract：Theproceedingsofproducehumaninsulinbyrecombinantyeastshowas

follow:getpurposegene→constructtherecombinantplasmid→constructthegenetic

engineeringbacteria→fermentationofengineeringbacterium→separationand

purificationoftheproduct→identificationoftheproduct.Thefrontthreeprocessesis

buildingengineeringbacteriaofhumaninsulinyeasts.Insulingenewassynthesized

accordingtotheaminoacidsequenceofhumaninsulinandyeastpreferentialcodons.

TheinsulingenewasclonedintopPIC9vectorandexpressionvectorpPINS319was

constructed.TheexpressionvectorwasdigestedwithBgllIandthenusedtotransform

PichiaPastorisGSll5byelectroporation.Theexpressionanalysisshowedthatthe

insulingenewsabletoexpressedefficientlyinPichiaPastoris.Theposteriorthree

processesislarge-scaleproductionbyfermentation.Throughfed-batchfermentation

gettingfermentationliquor,separationandpurificationthefermentationliquorgetting

humaninsulin.Thefinalproductspurifiedbysupedrex75showedonebandby

SDSanalysisandwereidenticalwiththenativehumaninsulinbyallcritetia

employed.(SDSanalysis,aminacidcompositionanalysisandbioidentityassay)

Keywords：recombinantyeast;humaninsulin;fermentation;purification;identification

胰岛素是FDA批准的第一个用于人类的基因重组药物。最初的重组表达是通

过大肠杆菌分别表达出胰岛素的A链和B链。现在，胰岛素作为重组蛋白产品，

主要有两条途径获得。一条途径是在大肠杆菌中表达胰岛素前体的包