4 流式细胞术在免疫学的应用课件.ppt

4流式细胞术在免疫学的应用三、免疫荧光测定的标本处理技术阳性标准和阴性对照：第一份细胞悬液直接加入二抗(FITc-羊抗鼠IgG)；第二份悬液先加入抗白细胞抗体，然后在加入第二抗体；第三份悬液先加入抗淋巴细胞单克隆抗体，再加入第二抗体4流式细胞术在免疫学的应用三、免疫荧光测定的标本处理技术阳性标准和阴性对照：分别将这三种标记后的细胞悬液上机检测，第一份悬液细胞的荧光强度最低，无阳性结合细胞，第二份有少量的细胞表达，说明该悬液中自细胞较少，第三份有较多的阳性细胞表达，证明有大量的淋巴细胞存在4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记与人体免疫功能有关的主要是淋巴细胞，具有细胞免疫功能主要是淋巴细胞中的T细胞亚群，而B细胞与体液免疫功能有关4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记T细胞亚群的功能:T细胞亚群在适应性免疫应答中起着关键作用，T细胞亚群的变化直接影响机体的免疫状态的强弱和结局，对于适应性免疫反应功能在时间、空间层面上的质与量的评价，可以通过T细胞亚群分布和功能检测来实现4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记T细胞亚群的功能:目前越来越多的研究表明，T淋巴细胞亚群在各种临床疾病(如：造血系统疾病，病毒感染和恶性肿瘤等)都有异常改变。在各种疾病的发生发展过程中测定人外周血中T抑制(T8)和T辅助(T4)淋巴细胞亚群比例，可用来评价体内细胞免疫调节平衡状态4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记T细胞亚群的功能:测定T亚群的相对标记率，特别是T细胞的免疫调节功能，可以帮助研究各种与免疫有关的疾病发病机制。所以，它可以作为临床免疫研究的手段，成为临床检验的一项重要指标4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记T细胞的功能及检测参数：抗原识别：主要通过检测T细胞受体(简称为TCR)与其相应的配体(MHC-主要组织相容性复合物)2T细胞活化：活化早期可以检测活化的表型物质CD25、CD71、CD69或MHC-Ⅱ分子和细胞因子IFN-γ、TNF-2等。也可检测细胞内钙离子升高和酪氨酸磷酸化酶等4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记T细胞的功能及检测参数：T细胞增殖：DNA细胞周期和Brdu掺入法，或者分析细胞周期相关蛋白等(如Cyclin-D1、D2、D3、E）4T细胞克隆扩增：可以检测T细胞受体V基因片断产物，应用其相应单克隆抗体，定量分析基因片断的取用频率，这是一项检测T细胞克隆的新技术4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记T细胞的功能及检测参数：T细胞分化：Th(Th1Th2)，Ts(Tsc/Ts)可以用细胞内细胞因子以及体液或培养液中的细胞因子，应用微球夹心免疫荧光法，这是近年来发展的一项新技术4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记T细胞的功能及检测参数：6T细胞的效应作用：可以检测Fas、FasL、颗粒酶或可检测细胞内凋亡指数Annexin-V(磷酸酯丝氨酸酶)等，也可检测Caspase酶(凋亡酶系统)T细胞免疫记忆功能：常用CD45亚型(CD45RO)4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记T细胞的免疫表型：根据T淋巴细胞免疫表型和功能分为①T总淋巴细胞CD3+②T辅助性细胞CD4+/CD3+③T抑制性细胞CD8+/CD3+④NK细胞CD56+/CD3+4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记FCM检测T细胞亚群的参考值：细胞表面抗原正常人参考范围CD361.1%－77.0%CD435.4%－52.0%CD818.4%－31.2%CD5610.4%－19.8%CD4/CD80.98－1.944流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记T细胞亚群的生物学意义：1T3+升高、T4+升高提示免疫功能增强，在这里并不单指细胞数量增加，还应该将T3+、T4+表达量(荧光量)增加也视为免疫功能增强4流式细胞术在免疫学的应用四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记T细胞亚群的生物学意义：2T8+升高提示免疫功能降低，但是