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天行健，君子以自强不息。地势坤，君子以厚德载物。——《周易》
【实验题目】
细菌芽孢染色
【实验目的】
1.学习并掌握芽孢染色法
2.了解芽孢的形态特征
【实验器材】
1、菌种：
枯草芽孢杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物、梭状芽胞杆菌1-2d牛肉
膏蛋白胨琼脂斜面培养物。
2、溶液和试剂：
a)5％孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液、无菌水
b)香柏油、二甲苯
3、仪器及其它用品：
普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层
瓶（内装香柏油和二甲苯）、试管夹等
【实验原理】
芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休
眠体结构，也被称为内生孢子，通常为圆形或椭圆形。在合适条件下，可吸水萌
天行健，君子以自强不息。地势坤，君子以厚德载物。——《周易》
发，重新形成一个新的菌体。是否产生芽孢，以及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊
是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。
与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚而致密，通透性低，不易着色，但是，芽
孢一旦着色就很难被脱色。利用这一特点，首先用着色能力强的染料（如孔雀绿）
在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进入芽孢，水洗脱色时，菌体中的染
料被洗脱，而芽孢中的染料仍保留。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和
芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。
【实验内容及步骤】
2、具体步骤：
1)洗片、干燥
取一块载玻片，用水浸湿，用手使用去污粉洗净玻片，竖立在一边自然干
燥。干燥后在玻片的一面用记号笔做好标记。方便以后水洗染料，避免洗去细菌。
2)涂片
取一块载玻片，在上边用胶头滴管加半滴无菌水，用接种环无菌操作将沾有
菌的接种环置于载玻片上的无菌水种涂抹，待看到微弱的浑浊即可；（注意取菌不
要太多）
3)加热固定
涂菌面朝上，通过火焰以干燥并固定菌物，固定过程应使载玻片通过火焰2-
3次，注意温度的控制，过热的温度会将细菌杀死，温度以手背感觉微微发烫为标
准；
4)染色
天行健，君子以自强不息。地势坤，君子以厚德载物。——《周易》
向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌位置，用夹子夹住载玻片在微火
上加热至染液冒蒸气并维持5min，加热时注意补充染液，切勿涂片干涸。
5)脱色
冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水为无色。
6)复染
用0.5%的番红水溶液复染2min。
7)水洗
用缓流自来水冲洗至流出水为无色。
8)干燥镜检
将制备好的样片置于显微镜下进行观察，先低倍观察，再高倍观察，并找出
适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油，用油镜观察细菌的形态。
【结果分析】
1、染色结果
镜检观察，芽孢呈绿色，菌体为红色。枯草芽孢杆菌菌体形态为短杆状，末
端钝圆，单生或形成短链，芽孢呈椭圆状，位于菌体中央或稍偏，含芽孢菌体不膨
大（见图1）。
梭装芽孢杆菌芽孢
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