仪器分析》第十四章分子发光光谱法.pptVIP

STEP03STEP04STEP01STEP02光源－氙灯和高压汞灯、激光器单色器－激发单色器和发射单色器样品池－四面透光的方形石英池检测器－光电倍增管、电荷偶合元件检测器可一次获得荧光二维光谱3分子荧光光谱的应用灵敏度高，检测下限低0.1~0.001?g/cm3，荧光分析法的应用广泛，可测定60余种元素，尤其是生物大分子的检测，还可以作为高效液相色谱及毛细管电泳的检测器。01定量分析：F＝??IaIa＝I0－It＝I0（1－10-?bc）＝I0（1－e-2.303?bc）02对于很稀的溶液，即?bc?0.05，此时上面的式子中第二项以后的各项可以忽略不计，即因此，当激发光强度一定，并且溶液浓度较小时，荧光强度与荧光物质浓度之间成正比：If＝Kc1－e-2.303?bc＝2.303?bcIf＝??Ia＝??I0?2.303?bc对于较浓的溶液，其吸光度大于0.05时，荧光强度与浓度的线性关系将出现偏离。单组分直接测定单组分间接测定化学反应转化为荧光分子荧光猝灭法多组分的荧光测定荧光峰不重叠，选不同的发射波长；激发光谱明显不同，荧光峰重叠，可选用不同的激发波长010302无机物分析：无机阳离子本身不发荧光，可与一些有机试剂形成荧光配合物，可以测定的元素已达60多种溶液单分子行为研究：罗丹明6G标记DNA基因研究与检测：DNA与小分子的相互作用等生物化学和生理医学：能测定微量氨基酸和蛋白质，还能研究蛋白质的结构，酶以及酶动力学和机理，细胞新陈代谢等药物分析：分析低浓度的药物，6－巯基嘌呤是急性白血病的重要药剂，相关分析方法还较少。用高锰酸钾将6－巯基嘌呤氧化形成嘌呤－6－磺酸盐，即可用荧光法进行测定激发单重态与激发三重态振动能级重叠时，发生系间跨越，从激发单重态转到能量较低的三重态，迅速振动驰豫到三重态最低振动能级，在10-4秒至几秒内发射磷光回到基态。磷光和荧光都是光致发光，同样具有两个特征光谱，即磷光激发光谱和发射光谱。当激发光强度一定和被测物质浓度很低时，发射的磷光强度与浓度成正比。4磷光光谱法三重态与基态间的能量差小，振动耦合强，增强了内部转换，非辐射跃迁的竞争大。激发三重态的寿命长，同溶剂分子或其它溶质分子碰撞概率大，在室温下很少观察到磷光现象。将温度降低至液氮温度（77K），许多介质均形成刚性玻璃体，碰撞和振动耦合降至最低限度，几乎所有三重态得激发分子都会发出磷光。室温磷光：试样固定在固体基体上、溶解在胶束溶液或环糊精溶液中，增强刚性，减少碰撞猝灭试样管盛液氮的杜瓦瓶至发射单色器来自激发单色器磷光分析仪测定磷光的仪器与荧光仪器基本相同。但为了在低温下测定，样品试液的石英管必须放在盛液氮的杜瓦瓶中。因为发磷光的物质常常发荧光，为了将二者分开，需一个附加的机械切光器，构成磷光计。磷光分子常用溶剂为按5：5：2比例混合的二乙醚：异戊烷：乙醇的化合物，称为EPA混合溶剂，在液氮温度时，成为透明的刚性玻璃体。01主要用于环境分析、药物研究等。例如血清或血浆中乙酰水杨酸（阿司匹林）、血清中普鲁卡因、苯巴比妥等的测定。02磷光分析对于室温下不发荧光或者荧光很弱，低温下发磷光的十分有效。03荧光光谱重叠的两组分，采用磷光分析有可能取得满意的结果。例如吲哚和色氨酸的荧光光谱几乎相同，但在低温下磷光光谱易于区分。04分子发光光谱法基本要求：理解分子荧光和分子磷光的基本原理理解分子荧光激发光谱、发射光谱、同步光谱和三维荧光光谱的含义掌握分子荧光发射光谱的特性了解荧光光谱仪的组成和各部分作用掌握荧光分析法和磷光分析法的主要应用范围了解化学发光分析法的原理和应用分子发光光谱法包括：光致发光分子荧光分子磷光化学发光生物发光灵敏度较紫外-可见吸收光谱法高几个数量级。1荧光和磷光的基本机理分子荧光与磷光的产生：01230123012S101240123S0S2T1T2内转换外转换振动驰豫系间跨越?1?2?3?4吸收吸收荧光磷光对于大多数有机物分子，其电子数为偶数，净自旋之和为S＝0，即基态分子为单重态（M＝2S+1=1）。01根据光谱选律，分子直接被激发到三重态T1的概率比较小，因为是S0－T1禁阻跃迁。03分子处于激发态时，某个电子可能会改变自旋方向，即自旋平行，此时S＝1/2+1/2=1，分子处于这样的激发态为三重态，以T表示。由于自旋平行比自旋配对的状态更稳定，因此三重态能级比单重态略低。02分子的去激发过程速率最快，激发态寿命最短的途径占优势。振动驰豫－