真菌检验技术（微生物检验技术）.pptx

;是一大类具有典型细胞核和完整细胞器，无根、茎、叶和不含叶绿素为特征的真核细胞型微生物。可由单细胞或多细胞组成的，不含肽聚糖，主要由多糖和蛋白质等组成的厚细胞壁。

;真菌的形态多种多样，依据不同有不同类别：;单细胞真菌

圆形或卵圆形，称为酵母菌或类酵母菌。

多以出芽方式繁殖，芽生孢子成熟后脱落成新的独立个体。

对人致病的的主要有白色念珠菌和新型隐球菌。;多细胞真菌

由菌丝和孢子组成，菌丝伸长分支，交织成团，亦称丝状真菌或霉菌。

菌丝和孢子是鉴别真菌的重要标志;注:双相型真菌：某种致病性真菌在自然界或在一般培养基上生长菌丝型，而在感染组织内或营养丰富的培养基上使用特殊培养方法，发育成酵母型，这种现象称为双相性，具有这种特性的真菌称为双相型真菌。其致病力强，可引起全身性感染。如皮炎芽生菌、白色念珠菌。简言之，在不同培养条件下，有时形成孢子，有时形成菌丝的真菌。;（二）菌丝;;菌丝体镜下结构;是真菌的繁殖结构，也是鉴定真菌的一项重要依据。;是由菌丝体细胞出芽生成，当其长到一定大小成熟时即脱离母体，单独成为一个新的个体。若不脱离则形成假菌丝。常见于隐球菌和念珠菌。;假菌丝和真菌丝的区别;某些种类的真菌(如黄廯菌、白念等)在一定情况下(如营养不充分、衰老等)，菌丝前端或中间的细胞质浓缩，周围有厚壁包绕的一种抵抗力增强的孢子，其是真菌的一种休眠细胞，环境好转时可生成芽管延长形成菌丝。

白念珠菌由于可产生丰富的厚膜孢子与其它念珠菌相鉴别。

;大分生孢子;区别点;第二节真菌的繁殖与培养;营养要求不高，常用沙保罗培养基，pH4～6，并需较高的湿度和氧、糖。

如培养基中加入氯霉素抑制细菌生长，加入放线菌酮抑制污染真菌，有利病原性真菌的检出。

浅部真菌T22～28℃，生长缓慢，约1～4w可见菌落。深部真菌T35-37℃，生长较快，经1～2d长出菌落。

;类酵母型菌落;（1）酵母型菌落：单细胞真菌的菌落形式，光滑湿润如奶油样，柔软，类似一般??菌菌落，镜下只见芽生孢子，无菌丝。如新生隐球菌。;（2）酵母样菌落：单细胞真菌的菌落形式，外观同酵母型菌落，但镜检除见芽生细胞外，还见假菌丝。如白色念珠菌。;（3）丝状菌落：多细胞真菌即丝状菌的菌落形式。由许多疏松的菌丝体形成，肉眼可见菌落的中心、边缘及其正、反面可呈不同颜色，长短不一的“毛”，如毛绒状、粉末状等、色素可作为鉴定菌种的参考。;繁殖方式;当机体局部或全身免疫功能降低及菌群失调时，某些真菌如白念可引起感染，近年此类感染有增多趋势。

;产毒性真菌：

食物中产毒性真菌多数属于曲霉菌属、青霉菌属及镰刀菌属，其中产毒最强的有以下三种：

1．黄曲霉菌：可产生黄曲霉毒素。可引起中毒性肝炎，长期进食少量污染的食物后，可导致肝癌或肝硬化。

2．镰刀菌：可产生赤霉病麦毒素。引起食物中毒。

3．桔青霉菌：可产生桔青霉毒素。可以引起急性或慢性肾病变。

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;（四）过敏性真菌病：;（一）不染色标本的检查：;生理盐水法——电镜下观察;（一）不染色标本的检查：;病损指甲在10%KOH作用下镜下现象;（一）不染色标本的检查：;6．荧光染色;革兰染色;糖原染色;（三）分离培养：;4）玉米粉吐温80琼脂：观察厚膜孢子。;3．近年来非致病菌引起的感染或2种以上真菌的混合感染经常报道，因此即使认为是杂菌生长，在菌落较多时，也应分别将菌钩取进行分离培养或加入抗生素分离培养。;1．糖发酵试验是厌氧时，真菌能否分解糖类产生CO2或乙醇，根据糖发酵管pH改变判定。;临床上真菌的常规检查;镜检;2、真菌的分离培养;（2）培养;三、真菌的鉴定;1、琼脂平板直接鉴定念珠菌;绿色;兰灰色;手工鉴定酵母菌的生化与酶法;第十四章

真菌检验技术;第一节真菌形态检验技术;;临床标本;二、直接镜检

;三、染色镜检

革兰染色：各种真菌均为革兰阳性（图1）

乳酸酚棉蓝染色：常用，染成蓝色（图2）

墨汁染色：用于有荚膜的真菌，背景染成黑色，菌体不着色（图3）

荧光染色：荧光显微镜下发出荧光

糖原染色：多糖成分呈红色，核为蓝色，背景为淡绿色;一、基本条件

培养基真菌营养要求不高，最适pH4.0～6.0

常用的培养基:;;白色念珠菌：

热带念珠菌：

克柔念珠菌：

光滑念珠菌：