任务三细菌菌落总数的测定.ppt

检样做几个适当倍数的稀释液选择2~3个适宜稀释度各1mL,分别加入灭菌平皿内平皿内倾注15～20mL琼脂培养基，混匀36±1℃培养48±2小时或（24±2）小时记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量计算菌落总数→报告和培养

无菌操作取检样25g（mL），放于225mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振荡或研磨制成1:10的均匀稀释液。固体和半固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000～10000r/min的速度处理1～2min，制成1:10的均匀稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内，振摇试管或反复吹打混合均匀，制成1:100的稀释液。PARTONE3?、另取1mL灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1mL吸管。根据标准要求或对污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在制作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。同时分别取1ml稀释液（不含样品）加入两个灭菌平皿内作空白对照。5?、稀释液移入平皿后，将冷却至46℃琼脂培养基注入平皿约15～20ml，并转动平皿，混合均匀。PARTONE琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，水产品30±1℃温箱内培养72±3h。添加标题如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4毫升），凝固后培养。添加标题落记录方法

做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数。到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0～4℃，但不要超过24h。皿菌落数的选择

选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用两个平皿，大于300的可记为多不可计。其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可以计算半个平板后乘以2，以代表一个平板的菌落数。当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。菌落总数的计算若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）中菌落总数结果。试样例次稀释度选定计数稀释度菌量/(个/g或mL)10-210-310-41平均菌落数380521810-35.2x10425262053210-3，10-42.6x10534352104810-3，10-43.5x10542841523710-2，10-39.0x10452612510-22.6x1036无法计数56831210-43.1x106单击此处可添加副标题单击此处添加大标题内容若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按如下公式计算：

N=∑C/（n1+0.1n2）d…………（1)

式中：

N―样品中菌落数；

∑C―平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；

nl―第一个适宜稀释度平板数；

n2―第二个适宜稀释度平板数；

d―稀释因子（第一稀释度）。例如：

稀释度?1:100（第一稀释度）?1:1000（第二稀释度）

菌落数????232，244???33，35

232+244+33+35(2+0.1×2)×10-2=544/0.022=24727四舍五入表示为:2.5×104试样例次稀释度选定计数稀释度菌量/(个/g或mL)10-210-310-41平均菌落数380521810-35.2x10425262053210-3，10-42.6x10534352104810-3，10-43.5x10542841523710-2，10-39.0x10452612510-22.6x1036无法计数56831210-43.1x106所有稀释度的平板菌落数均300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数