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微生物的利用、浅尝现代生物技术
章
学问内容
考试属性及要求
考查频率
加试
微生物的利用
1.大肠杆菌的培育和分别
2.分别以尿素为氮源的微生物
试验与探究实力
(1)能独立完成“生物学问内容表”所列的生物试验(活动),包括理解试验目的、原理、方法和操作步骤,驾驭相关的操作技能,并能将这些试验涉及的方法和技能进行综合运用。
(2)具备验证简洁生物学事实的实力,能设计试验,提出或完善试验思路,能对试验现象和结果进行处理、分析和说明。
(3)具有对一些生物学问题进行初步探究的实力,能提出问题、做出假设和预期、确认变量、设计试验方案、处理和说明数据、做出合理的推断,能对一些简洁的试验方案做出恰当的评价和修订。
2015年10月第32题(1)(3分)
2024年10月第32题(一)(7分)
2024年4月第32题(一)(1)(2分)
酶的应用
3.果汁中的果胶和果胶酶
4.α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测
2024年4月第32题(一)(7分)
2024年10月第32题(一)(4)(1分)
生物技术在食品加工中的应用
5.果酒及果醋的制作
6.泡菜的腌制和亚硝酸的测定
2024年4月第32题(一)(2)(3)(5分)
浅尝现代生物技术
7.植物的组织培育
2015年10月第32题(3)(5)(3分)
第29讲微生物的利用、浅尝现代生物技术
考点一微生物的利用
一、大肠杆菌的培育和分别
1.大肠杆菌
(1)特性:革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。
(2)细菌的繁殖:以分裂的方式繁殖,分裂速度很快。
2.细菌的扩大培育
扩大培育用LB液体培育基。
3.分别
划线分别用LB固体平面培育基。
培育基灭菌
↓
倒平板
↓
接种
↓
划线分别
↓
培育视察
↓
菌种保存
50mLLB液体培育基和50mLLB固体培育基及培育皿高压蒸汽灭菌
将培育基分别倒入4个灭菌后的培育皿中,水平放置,使之形成平面
在装有液体培育基的三角瓶中接种大肠杆菌,培育12h
用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次,在固体培育基的平板上连续划线,盖好培育皿
培育皿倒置(盖在下面),放在37℃恒温培育箱中培育12~24h,可看到划线的末端出现不连续的单个菌落
在无菌操作下将单菌落用接种环取出,再用划线法接种在斜面上,37℃培育24h后,置于4__℃冰箱中保存
4.消毒和灭菌比较
条件
结果
常用方法
应用范围
消毒
较为温柔的物理或化学方法
仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物
紫外线消毒法
接种室、超净台
化学药剂消毒法
用酒精擦拭双手,用氯气消毒水源
灭菌
剧烈的理化因素
杀死物体内外全部的微生物,包括芽孢和孢子
灼烧灭菌法
接种工具
干热灭菌法
玻璃器皿、金属工具
高压蒸汽灭菌法
培育基及容器的灭菌
过滤除菌
不能加热灭菌的化合物,要用G6玻璃砂漏斗过滤
二、分别以尿素为氮源的微生物
1.菌种特点
含有脲酶,可以通过降解尿素作为其生长的氮源。
2.培育基
用以尿素为唯一氮源的培育基培育,以LB全养分培育基为比照。
3.试验原理
(1)筛选以尿素为氮源的微生物,可运用以尿素为唯一氮源的选择培育基进行培育选择。
(2)细菌合成的脲酶能将尿素分解成NH3,致使pH上升,使酚红指示剂变红。
4.试验步骤
制备培育基:将已灭菌的LB固体培育基和尿素固体培育基分别倒入两个培育皿中,摇匀,平放至凝固
↓
制备细菌悬液:用1g土样和无菌水配制不同浓度的细菌悬液
↓
用涂布分别法分别细菌:将不同浓度的土壤稀释液分别加入到有LB培育基和尿素培育基的培育皿中,每个浓度分别各接种到三个培育皿中,并用玻璃刮刀涂布到整个平面上
↓
培育:将培育皿倒置,在37℃恒温箱中培育24~48h
↓
视察:培育基中菌落数量
5.反应的鉴定
在配制培育基时,加入指示剂酚红,培育时细菌将尿素分解产生碱性的氨,使培育基上菌落四周出现红色的环带。
6.微生物接种的两种常用方法比较
比较
划线分别法
涂布分别法
工具
接种环
玻璃刮刀
原理
通过接种环在固体培育基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培育基表面。在数次划线后培育,可以分别到由一个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体,即菌落
将菌液用无菌水进行梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别用涂布器涂布到固体培育基的表面,进行培育。在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞,从而能在培育基表面形成单个的菌落
特点
方法简洁,但不相宜计数
单菌落更易分开,但操作困难些
目的
使培育基上形成单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落
1.(2015·10月浙江选考节选)科研人员拟将已知的花色基因(目的基因)转入矮牵牛的核基因组中,培育新花色的矮牵牛。请回答
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