免疫学技术在科研中的应用.ppt

放射免疫测定法广泛应用于激素、药物等微量物质的检测。既有同位素的敏感性又有抗原抗体结合的特异性，同时具有重复性好、准确性高、标本用量少等优点。用放射性同位素标记抗原或抗体进行的免疫测定。单击此处可添加副标题免疫胶体金技术氯金酸(HAuCl+)在还原剂作用下，产生分散状态的胶体金颗粒。碱性条件下，金颗粒表面带负电荷，与蛋白质正电荷基团结合。胶体金可标记白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、激素、脂蛋白、植物血凝素、卵白素等。大分子以单层形式吸附在金颗粒表面。不同还原剂作用于氯金酸，产生的胶体金粒径大小不相同(5—50nm)，小粒径的胶体金由于穿透性好，电子密度高，常被用于免疫电镜技术。这些小粒径的金颗粒，经银显影液处理后，金粒子还原银离子生成银颗粒而吸附在金颗粒周围呈黑褐色，从而放大了金颗粒的显色效果，又称免疫金银法。胶体金颜色随颗粒大小而变化，大于20nm的金颗粒在光镜下呈现砖红色，可在光镜水平行免疫分析，也可用银显影剂增强，进一步提高灵敏度。当胶体金的粒径较大、浓度密集时肉眼水平即可观察，即胶体金斑点渗滤试验和胶体金斑点免疫层析试验。免疫细胞的检测免疫细胞的分离磁珠分离法fluorescence-activatedcellsorter，FACS免疫细胞功能的测定T细胞B细胞磁珠分离法特异性分离所需淋巴细胞的方法。将特异性抗体(如抗CD3、抗CD4、抗CD8等)吸附在铁颗粒(磁珠)上，加至细胞悬液中，具有相应抗原的细胞与磁珠上的特异性抗体结合。反应管置于磁场中，铁颗粒受磁场的吸引，携带有相应细胞的磁球吸附于靠近磁铁的管壁上。弃细胞悬液，重新解离细胞与磁珠。fluorescence-activatedcellsorter，FACSPARTONET细胞鉴定及功能测定使用酶、免疫荧光标记单抗进行鉴定淋巴细胞转化试验E花环形成试验混合淋巴细胞培养CTL介导的细胞毒试验抗原肽—MHC分子四聚体技术tetramer用生物素化的抗原肽—MHC分子复合物与荧光标记的亲合素结合，由于1个荧光素标记的亲合素可结合4个生物素分子，能使4个MHC／抗原肽复合物形成一个复合体，将该复合体标记荧光素后，即成抗原特异性四聚体。01MHC分子可为工类或Ⅱ类分子，与抗原肽形成的四聚体复合物，可分别鉴定表达特异性TCR的CD8+T细胞及CD4+T细胞的频率。03抗原特异性四聚体能与样品中的特异性T细胞的TCR结合，由于四聚体能同时结合一个T细胞表面的4个TCR，亲和力大大提高。用流式细胞术即可确定待检标本中抗原特异性CTL细胞的频率。02B细胞的鉴定及功能测定检测B细胞分化抗原测定B细胞产生抗体的能力溶血空斑试验ELISPOT细胞因子的检测生物活性检测免疫学检测法分子生物学技术基因敲除技术和转基因动物应用基因同源重组，将外源有功能基因(基因组中原先不存在、或已失活的基因)，转入细胞与基因组中的同源序列进行同源重组，插人到基因组中，在细胞内获得表达。通过同源重组产生目标基因缺失或失活的转基因动物可以确定被敲除的基因在体内代谢过程中的作用，还可确定被敲除基因在分化、发育、生存等过程中的作用和必要性。转基因动物可以作为疾病模型。可以用于药物筛选的动物模型。转基因动物可作为“生物反应器”生产药物。Th细胞在mCTL介导的肿瘤保护中作用的研究第一章节相关说明OT-1mice:表达SIINFEKL特异性TCROVA：鸡卵白蛋白OVACTLepitope:SIINFEKLOVAThepitope:ISQAVHAAHAEI-NEAGROVA（OVT）RAG-1KOmice:C57BL/6mice:IFA/CFA/KLHEG7celllineEL4cellline相关步骤OT-1细胞转输RAG-1-基因敲除小鼠，2天后以OT-1TCR特异性表位多肽SIINFEKL免疫；mCTLandeCTLgeneration01OVA特异性和非特异性Th表位多肽免疫C57BL/6小鼠以产生特异性和非特异性Th细胞；specificThgeneration02接种表达OVA抗原的肿瘤细胞EG7；tumorchallenge04记忆性CTL转输已产生特异性和非特异性Th的C57BL/6小鼠；mCTLtransfer03GenerationofOvalbumin-specific

MemoryCD8TCells.

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