2025年高考生物二轮复习第一部分考点突破专题九生物技术与工程 热点情境直击高考方向.pptxVIP

;专题九生物技术与工程;角度一PCR技术原理与条件;1．PCR过程中不需要解旋酶，需要升高温度才能打开氢键，但此时的温度不会破坏磷酸二酯键。因此，双链DNA加热变性后变为单链，并未分解成单体。

2．PCR过程中使用的耐高温的DNA聚合酶需要Mg2＋激活，因此PCR反应缓冲液中一般要添加Mg2＋。

3．PCR的扩增结果：DNA分子以指数形式扩增(约为2n，其中n为扩增循环次数)。;角度二PCR产物的电泳鉴定

1.原理：脱氧核苷三磷酸(dNTP)3′－C上的－OH被－H替换后转化为双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。在PCR反应体系中加入待测DNA片段、4种dNTP、1种32P标记的ddNTP和1种引物及其他所需材料，经扩增后获得不同长度的DNA片段混合物。利用每种32P标记的ddNTP分别进行PCR后，将产物点样在变性凝胶上进行电泳分离，通过放射性自显影检测，就可以读出DNA的核苷酸序列。;2.实例：如图中DNA片段的待测碱基序列5′－TTGGCTGCAA－3′。;角度三PCR技术的应用实例

1．扩增某DNA片段：将引物设计在DNA片段的两端。

2．从某一DNA分子上扩增其中一部分：将引物设计在要扩增的DNA片段两端。

3．定点突变：在引物的外侧(5′端)加上需要的序列(如限制酶切割位点、特定的启动子或标记序列等)。;1.(2024·苏州模拟)RNA的检测可以采用实时荧光RT－PCR(逆转录聚合酶链式反应)的方法，RT－PCR的具体过程如图，下列叙述正确的是()

;A．PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶

B．过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上需要2n个引物B

C．该技术用于对某些微量RNA病毒的检测，可提高检测的灵敏度

D．PCR反应中周期性的温度设置是特定的，与扩增的目的基因和引物无关

【答案】C;【解析】PCR体系中需要的是耐高温的DNA聚合酶，不是从受体细胞中提取的DNA聚合酶，A错误；过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增，根据DNA分子半保留复制特点可知，该过程理论上至少需要2n－1个引物B，B错误；利用实时荧光RT－PCR技术对某些微量RNA病毒进行检测时，可提高检测的灵敏度，是因为增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量(或浓度)，便于检测，C正确；PCR反应中温度呈现周期性变化，其中温度超过90℃的目的是双链DNA解??为单链，然后冷却到50℃左右使引物与互补DNA链结合，继续加热到72℃左右，目的是在耐高温的DNA聚合酶作用下进行延伸。所以PCR反应中周期性的温度可在一定范围内设置，不是特定的，D错误。;2.(2024·广州模拟)由于原核细胞与真核细胞基因结构不同，植物的DNA片段连接成环，并以此环为模板，利用PCR技术扩增出T－DNA插入位置两侧的未知序列，以此可确定T－DNA插入的具体位置。下列说法错误的是();A．进行PCR扩增的依据是DNA分子双链复制的原理

B．进行PCR扩增需要的酶有解旋酶和耐高温的DNA聚合酶

C．利用图中的引物①④组合可扩增出两侧的未知序列

D．通过与受体细胞的基因组序列比对，可确定T－DNA的插入位置

【答案】B;【解析】PCR扩增依据的是DNA分子双链复制的原理，A正确；进行PCR扩增需要耐高温的DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)，但不需要解旋酶，B错误；DNA的两条链反向平行，子链从引物的3′端开始延伸，则利用图中的引物①④组合可扩增出两侧的未知序列，C正确；通过与受体细胞的基因组序列比对，即可确定T－DNA的插入位置，D正确。;3.(2024·忻州模拟)阅读资料1、资料2，回答下列问题。

【资料1】我国科学家把腺病毒中负责复制的关键基因剪切掉，但保留其侵染人体细胞的能力。随后，将其与逆转录获得的新型冠状病毒S蛋白(介导新型冠状病毒感染细胞的关键成分)基因整合，构建出了两种病毒的融合型病毒——重组腺病毒DNA疫苗。;【资料2】新型冠状病毒核酸测序能够监测新变异毒株的出现，具体做法是先提取新型冠状病毒RNA，利用RT－PCR技术(即将病毒RNA逆转录后再进行PCR扩增)获取目标DNA区域；随后进行DNA测序，通常采用双脱氧核苷酸测序法，其原理是双脱氧核苷酸(ddNTP)的2′、3′碳原子都不含羟基，在DNA合成过程中不能形成磷酸二酯键，因此可以中断DNA分子合成反应。在四个单独的PCR反应体系中，分别额外掺入ddATP、ddTTP、ddGTP、ddCTP，使DNA复制随机终止，产生不同长度的DNA片段，然后进行凝胶电泳分离检测，从而分析获得目标DNA区域的碱基序列。;(1)资料1中，构建出两种病毒的融合型病毒这一步骤在基因工程中被称为__________________________________