《转基因食品与安全》第5章转基因食品的检测和分析.pptxVIP

第五章转基因食品的检测

和分析

转基因食品的检测和分析：是指对深加工食品和食品原料种的转基因成分进行

检测。

■检测主要针对其中的DNA、蛋白质或脂肪酸等成分。

□基于DNA的检测方法可分为两类：

DNA杂交法：Southern、Northern、Western基于PCR的检测方法

第一节转基因阳性个体的分子鉴定

一、PCR技术

(一)标准PCR

1.优点

快速、灵敏、费用低，检测仅需微量DNA,可同时检测多个样品。

PCR

聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)是体外快速扩增DNA的方法。

◆PCR反应包括三个步骤：

●变性：在94-95℃使模板DNA的双链变性成单链。

●复性：两个引物分别与单链DNA互补复性，复性的温度在50-60℃

●延伸：在引物的引导及Taq酶的作用下，于72℃合成模板DNA的互补

链

这三个步骤称为一个循环，PCR反应常有25-35个循环。

2.程序

提取待测样品DNA—→设计引物、进行PCR—→PCR产物凝胶电泳检测

(1)提取DNA:经琼脂糖凝胶电泳检测完整性

(2)引物设计

目的基因

启动子：CaMV35S

终止子：Nos

外源DNA

人

大多数转基因作物的启动子是

CaMV35s,来自花椰菜花叶病毒DNA,

终止子为Nos,来自植物细菌，PCR检测

是对启动子、终止子的检测。

(3)琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物。

扩增条带的分子量与理论上应产生的

分子量相同，则说明被检测对象的基因组中含有外源基因。

例如：转基因棉花选择标记基因NPTI

编码区段的PCR扩增结果(M为分子量标准，C为非转基因植株，P为质粒对照，1-20为转基因植株)

…

kb

2.0-

1.0-0.5-

(二)定量PCR法

可知样品中含有多少量的外源基因。

如：竞争性PCR技术。

二、斑点印迹法

原位杂交：利用放射性或非放射性标记的已知核

酸探针，通过放射自显影检测特异DNA或RNA序列

的一种技术，是一种直接、简便的研究基因定位

和表达的方法。

提取DNA—→转移至硝酸纤维素膜上

以转入基因的片断作为探针}

→放射自显影

杂交

概念：

·探针：用化学方法将有识别能力的物质(如抗原、一段与目的基因互补的核酸序列)与酶或同位素结合成复合物作为探针。

●固相载体：用于吸附生命大分子物质的固体

●印记：把经凝胶电泳后的组分，通过吸附或

电泳方法转移或者直接吸附到固相载体上的

材料。

过程。

三、Southern杂交

提取DNA—→内切酶消化—→琼脂糖电泳

—一→转移至硝酸纤维素膜

探针}杂交

放射性自显影

如果膜上具有与杂交探针相同或部分同源的序列，就会检测到杂交带信号。

—→

Southern印迹杂交(Southernblot)是1975年由英国人southern创建，是研究

DNA图谱的基本技术，在遗传病诊断、

DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有

重要价值。

(b)

Southern杂交

eorrtrNAfratsmhitebeftrparatedbysize

e

s

as

en

gra

ave

ents

men

a

f

e

D

s

f

ofDNAfragmentsduring

electrophoresis-Buffersolution

positionedbetweentwo

PositiveElectrical

electrodecable

电泳

separatedbysize

afterelectrophoresis

ofelectrophoretic

tirreof

on

u

ti

t

ic

x

res

m

Powersupply

glassplates

Negative

electrode

Slotof

(a)

1975E.M.Southern

SouthernblotS.S.DNA×S.S.DNA

1977.J.C.Alwine

NorthernblotS.S.RNA×S.S.DNA

1978.HanyTowbin

Westernblot