原创力文档- 1、本文档共7页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
2
农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化技术规程
1范围
本文件确立了农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化技术的程序，规定了外植体来源、试剂与溶液、仪器、设备和用具、培养基准备、无菌苗培养、转化用农杆菌液准备、遗传转化、转基因苗移栽阶段的要求。
本文件适用于农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化技术的操作。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有规定的术语和定义。
4外植体来源
采集外植体的甘蔗应健康无病虫害，且是省级以上良种审（认）定的甘蔗品种。
5仪器、设备和用具
5.1仪器
主要有：
——可调移液器（0.2uL～10uL，10uL～200uL，100uL～1000uL，0.5mL～5mL)；——分析天平（精度0.1mg)；
——纯水仪；
——烧杯；
——三角瓶；
——培养瓶；
——量筒；
——离心管；
——培养皿。
5.2设备
主要有：
——超净工作台；
——生化培养箱；
——摇床；
——冰箱；
——高压灭菌锅；
——液氮罐；
——离心机。
3
5.3用具
主要有：
——镊子；
——手术刀；
——接种针；
——吸头；
——无菌滤纸；
——脱脂棉。
6试剂与溶液
6.1试验用水应符合GB/T6682中一级水的要求。除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂，所有试剂溶液宜大体积配制、小体积分装后经高压灭菌后使用，不宜高压灭菌的试剂应用0.22um膜过滤除菌。
6.2所使用的试剂及浓度、保存温度、英文名和缩写分别如下：——MS培养基：MScuLturemedium，常温保存；
——蔗糖：Sucrose,30g/L，常温保存；
——琼脂：Agar，6g/L，常温保存；
——2,4-二氯苯氧乙酸：2,4-D，1mg/mL，4℃保存；
——萘乙酸：NAA，1mg／mL，4℃保存；
——6-苄基氨基嘌呤：6-BA，1mg／mL，4℃保存；
——利福平：Rif，50mg／mL，-20℃保存3个月；
——葡萄糖：GLucose，10mmL/L，常温保存；
——果糖：Fructose，10mmL/L，常温保存；
——乙酰丁香酮：Acetosyringone（AS），100um/L，-20℃保存；
——头孢霉素：Cefradine（Cef），250mg/mL，-20℃保存。
7培养基准备
7.1培养基配制
7.1.1MS培养基配制
用电子天平称取12.52gMS培养基放入500mL三角瓶中，添加相应的激素，加蒸馏水定容至300mL，于高压灭菌锅121℃灭菌20min后于超净台分装至培养皿中，每皿倒25mL～30mL左右的培养基。培养基凝固后待用。需要配制的MS培养基pH为5.8，类型如下：
——愈伤组织诱导培养基MS0：MS+3.0mg/L2,4-D+30g/L蔗糖+6g/LAgar；
——愈伤组织继代培养基MS1：MS+2.0mg/L2,4-D+30g/L蔗糖+6g/LAgar；
——愈伤组织分化培养基MS2：MS+2.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+6g/LAgar；
——壮苗培养基MS3：MS+1.0mg/L6-BA+0.05mg/LNAA+30g/L蔗糖+6g/LAgar；——生根培养基MS4：MS+4.0mg/LNAA+30g/L蔗糖+6g/LAgar。
7.1.2MR培养基配制
用电子天平称取2.09gMS培养基放入500mL三角瓶中，添加4mg/L的NAA，200μmoL/LAS，10mmoL/L果糖，10mmoL/L葡萄糖，加蒸馏水定容至100mL。
7.1.3YEP培养基配制
用电子天平称取10g胰蛋白胨，10g酵母提取物，5g氯化钠，15g琼脂（液体培养基不加琼脂）放入1L量杯中，加入蒸馏水定容至1L,PH值7.0，混匀后分装至150mL的玻璃瓶中，每瓶装100mL，于高压灭菌锅121℃灭菌20min，备用。需要的溶液配制方法如下：
4
——2,4-D(1mg/mL)：称取100mg的2,4-D加入少量95％的酒精和1moL/L的NaOH使其溶解，再加灭菌蒸馏水定容至100mL即可用；
——NAA（1mg／mL）：称100mgNAA干粉，用热的ddH2O
文档评论（0）