DB12T 1189-2023 牛亲子鉴定技术规程.docxVIP

ICS65.020.30CCSB43

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天津市地方标准

DB12/T1189—2023

牛亲子鉴定技术规程

Technicalspecificationforparentageidentificationincattle

2023-04-07发布2023-05-07实施

天津市市场监督管理委员会发布

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DB12/T1189—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由天津市农业农村委员会提出并归口。

本文件起草单位：天津市农业科学院。

本文件主要起草人：马毅、赵欣、陈丽丽、张漫、谭冬飞、赵康、芦娜、王丽学。

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DB12/T1189—2023

牛亲子鉴定技术规程

1范围

本文件规定了牛亲子鉴定的技术方法。

本文件适用于牛（Bostaurus）亲子鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法GB/T27642牛个体及亲子鉴定微卫星DNA法

NY/T1672绵羊多胎主效基因FecB分子检测技术规程

SN/T1193基因检验实验室技术要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

等位基因数allele，A

反映群体遗传变异大小的一个指标，其数值越接近所检测到的等位基因的绝对数，表明等位基因在群体中分布越均匀。

3.2

期望杂合度heterogosity，He

期望杂合度主要是根据种群内当前优势等位基因的分布频率来推算的，稀有基因的贡献极其微弱。3.3

多态信息含量polymorphicinformationcontent，PICDNA的多态性指标。

Pi和Pj分别为第i个和第j个等位基因频率，n为等位基因数。3.4

排除概率PE

在亲子鉴定中一个随机的个体被排除为亲生父亲的概率，是评价微卫星标记在亲子鉴定中实用价值大小的一个指标。

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DB12/T1189—2023

(1)当没有另一亲本信息时，排除子代与假设亲本是亲子关系的排除概率：

(2)累计排除概率：

CPE=1-(1-P1)(1-P2)…(1-Pk)

3.5

微卫星DNAmicrosatellite

又称短串联重复序列（STR）或简单重复序列（SSR），一类广泛存在于真核生物基因组中的，核心序列为2～6bp，重复次数通常为15～30次的DNA串联重复序列。

3.6

多重聚合酶链反应multiplexPCR

又称多重引物PCR或复合PCR，在同一PCR反应体系中加入两对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应。

4鉴定原理

利用常染色体微卫星分型技术，选取不同染色体上的微卫星位点，采用多重PCR技术扩增微卫星标记，检测微卫星位点的遗传多态性，分型得出各位点等位基因的大小，通过软件统计分析，确定或排除亲子关系。

5试剂配制

水为符合GB/T6682的一级水；高压灭菌条件为1.034×105Pa压力，蒸汽灭菌20min。试剂配制如下：

——ACD抗凝剂：柠檬酸0.48g、柠檬酸钠1.32g、葡萄糖1.47g，定容于100mL水中，高压灭菌；

——10%SDS（十二烷基硫酸钠）：100gSDS溶于90mL水中，加热至68℃助溶，用HCl调pH至7.2，定容至1000mL，0.2μm的滤膜过滤，高压灭菌；

——PBS（磷酸缓冲液）：8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4、0.24gKH2PO4溶于800mL蒸馏水中，用HCl调pH至7.4，加水定容至1000mL，高压灭菌，室温保存；

——0.5mol/LNaCl（氯化钠）：5.844gNaCl溶于双蒸水中，加水定容至200mL，高压灭菌；——蛋白酶K（20mg/mL）：200mg蛋白酶K定溶于10mL水中，以1mL分装，-20℃冷冻保存；——氯仿：异戊醇（24：1）：异戊醇2mL加入到500mL的氯仿试剂瓶中，混匀；

——1mol/LTris-HCl（pH=8）：将121.1gTris溶于80