免疫标记技术的基本概念教学.pptVIP

均相型（homogenous）非均相型（heterogeneous）按测定方式划分的类型均相型（homogenous）非均相型（heterogeneous）双标记均相荧光免疫测定酶扩大免疫测定技术免疫组化技术免疫测定技术按测定用途划分的类型ELISA技术的原理与方法01ELISA技术的操作注意要点02第二节酶联免疫吸附试验间接法夹心法竞争法ELISA技术的原理与方法间接法夹心法竞争法酶标仪酶标仪01试剂器材02操作环节03合适工作浓度ELISA技术的操作注意要点第一节免疫标记技术的基本概念一、免疫标记与标记免疫的概念二、常用的免疫标记物质免疫标记与标记免疫01免疫标记技术：02标记物与免疫活性物质的联接技术03标记免疫技术：以标记免疫物质检测相应靶物质的技术04常用的免疫标记物质类别标记物用途荧光素FITC、RB200、TRITC免疫组化镧系元素螯合物免疫分析测定放射性核素3H、14C、32P、57Gr免疫分析测定125I、131I酶HRP、AP免疫组化免疫分析测定化学发光物Luminol、lucigenin免疫分析测定金属颗粒胶体金、铁蛋白免疫组化免疫分析测定01常用标记方法02标记免疫物的分离与鉴定第二节酶标记技术011、常用酶辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酶（AP）022、标记方法戊二醛交联法过碘酸盐氧化法常用标记方法酶-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶3124抗体-NH2+COH-（CH2）3-COH+NH2-酶抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-抗体戊二醛交联法(一步法）01COH-（CH2）3-COH+NH2-酶02抗体-NH2+CHO-（CH2）3-CH=NH2-酶03抗体-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶戊二醛交联法（二步法）过碘酸盐氧化法OOOOOONaIO4OOOHOOOHOH+NH2抗体OOONN抗体抗体H2ON抗体NaBH4Schiff碱酶-五炭糖环目的：去除游离酶方法：盐析、柱层析1、分离01抗体活性酶活性标记物纯度2、鉴定02标记免疫物的分离与鉴定常用标记方法标记免疫物的分离与纯化第三节荧光标记技术荧光素的概念生物标记荧光素的要求常用荧光素标记原理与方法常用标记方法具有与蛋白质共价结合的能力01荧光效率高02能与背景物质形成鲜明对比03不影响蛋白质的生物、免疫活性04标记方法安全、简便05标记物稳定，易保存06生物标记荧光素的要求荧光素-N=C=S+NH2-抗体荧光素-N-C-N-抗体HSHFITC的标记原理与方法1荧光素-SO2Cl+NH2-抗体2荧光素-SO2-NH-抗体+HCl3荧光素-SO3Na+PCl5荧光素-SO2Cl+PCl3+NaClRB200的标记原理与方法1、分离目的：去除游离荧光素方法：柱层析2、鉴定抗体活性标记物结合度F/P比值的应用意义标记免疫物的分离与鉴定常用标记方法标记免疫物的分离与纯化第四节放射性核素标记技术常用放射性核素01125I的标记方法直接法（氯胺T法）间接法（连接法）02常用标