微生物的选择培养和计数导学案 高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.docxVIP

1.2.2、微生物的选择培养和计数

【学习目标】

1.概述培养基的配制方法和微生物纯培养的基本操作要求，进行酵母菌的纯培养。

2、阐明微生物选择培养的原理。

3、进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。

【学习重难点】

重点：

1．微生物纯培养的基本操作及微生物选择培养的原理。

2．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数。

难点：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数。

知识梳理

1．选择培养基：在微生物学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。

2.如何设计培养基筛选分解尿素的细菌？

以尿素作为唯一氮源设计选择培养基，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖。

3.在选择培养基上生长的一定是所选择的目的菌吗？

不一定，有些微生物可以利用目的菌的代谢产物来生长繁殖，所以还需要进一步验证。

（二）微生物的选择培养

4.稀释涂布平板法基础操作：

梯度稀释和涂布平板。

5.平板划线法的作用：分离纯化微生物。

稀释涂布平板法的作用：分离纯化微生物、统计样品中活菌的数目。

（三）微生物的数量测定

1.微生物的数量测定方法：

间接计数法——稀释涂布平板法、

直接计数法——显微镜直接计数法。

2．稀释涂布平板法的计数原则：

（1）选择菌落数为30-300的平板计数；

（2）同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。

3.稀释涂布平板法结果分析：

（1）统计的菌落数往往比活菌的实际数目少；这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

（2）统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。

4.C代表某一稀释度下平板上生长菌落数的平均值；V代表涂布平板时吸取的稀释液体积数值(mL)；M代表稀释倍数；则每g样品中的细菌数=（C÷V）×M。

5.显微直接计数法使用的计数工具：

血细胞计数板常用对相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等计数；

细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。

6.显微直接计数法缺点：

统计结果一般是活菌数和死菌数的总和。原因：不能区分死菌与活菌。

7、微生物的培养与观察

（1）培养条件：细菌一般在30-37℃的温度下培养1-2d。

（2）观察：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。

（3）为什么选取菌落数目稳定时的记录作为结果？防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

（4）一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。

一、分解尿素细菌的进一步鉴定

1.原理:细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，因此可以通过检测培养基pH的变化来判断是否发生了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌；

2.方法:在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红。

二、大肠杆菌菌落鉴定：伊红-美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色。

三、纤维素分解菌鉴定：在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈。

达标检测

题

1.某同学利用稀释涂布平板法进行土壤微生物的数量测定,该同学首先将得到的1mL土壤样液稀释100倍,然后取0.1mL稀释液均匀地涂布在培养基表面,重复3个平板,在适宜条件下培养一段时间后,3个平板上的菌落数分别为71、73和75。下列叙述错误的是()

A.可得出该土壤样液中活菌数大约为7.3×107个/L

B.此方法统计的菌落数往往比实际的活菌数目低

C.一般选择菌落数在30~300的平板进行计数

D.显微镜直接计数法统计的都是稀释液中活菌数

2.用来判断选择培养基是否起到了选择作用的对照是()

A.未接种的选择培养基

B.未接种的牛肉膏蛋白胨培养基

C.接种了的牛肉膏蛋白胨培养基

D.接种了的选择培养基

3.下列关于微生物分离和培养的叙述,错误的是()

A.微生物培养基中加入牛肉膏和蛋白胨可以同时提供碳源和氮源

B.测定土壤样品中的活菌数目,常用平板划线法

C.培养基不一定都使用高压蒸汽灭菌

D.以尿素作为唯一氮源的培养基可以分离得到能分解尿素的细菌

4.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目时,在某稀释度下某同学做了若干个平板并统计每个平板的菌落数,最接近样品中菌体数真实值的是()

A.菌落数最多的平板

B.菌落数最少的平板

C.菌落数适中的平板

D.若干个平板菌落数的平均值

5.含氨苄西林的LB培养基在基因工程中有很重要的应用。该培养基能杀死一切不抗氨苄西林的细菌,只有对氨苄西林具有抗性的细菌才能正常生长繁殖。由其作用可知该培养基是一种()

A.固体培养基 B.合成培养基