第九章免疫学实验技术概述ppt课件.pptxVIP

第九章免疫学实验技术概述;血清学反应：体外发生的抗原抗体反应。;二、血清学反应的一般规律

(一)特异性

Ab只能与相应Ag特异结合。

Ag表面常具有多个(多种)不同表位，所以免疫血清中也应含有相应多种特异性Ab。;;（二）交叉性

交叉抗原：不同的Ag物质之间存在相同的Ag表位时，称为交叉抗原。

交叉反应：又不同抗原制备的抗血清除与各自的相应Ag发生反应外，尚能与对方Ag发生反应。

通常两种Ag之间亲缘关系越近，交叉反应程度越高。;;(五)结合力与离解力

Ag，Ab的结合为弱能量的非共价健结合，其结合力决定于Ag表位与Ab的结合点之间所形成的非共价健的数量，性质和距离，包括4种力的作用：;Ag-Ab结合的离解力

指Ag-Ab结合具有可逆性，因为Ag-Ab之间靠非共价结合，因此在一定条件下可使其解离。解离后的Ag-Ab仍保留其原有活性。;(六)结合比例

Ag与Ab的结合常需适当比例才出现可见反

应，在最适比例时反应最明显；

这种现象可以用“格子学说”来解释：Ab(1gG)

为二价，Ag通常为多价，只有Ag，Ab结合形

成大的复合物，肉眼才可见；;带现象

只有当Ag与Ab比例适当时，才能形成大的复合物，比例不适当，就只能形成小的复合物而抑制反应现象的出现.

前带现象：Ab过剩，Ag过少；稀释Ab

后带现象：Ag过剩，Ab过少；稀释Ag。;(七)血清学反应的影响因素

1．电介质：生理盐水，缓冲盐水，少数动物(禽)血清用8.5％NaCl；

2．温度；

3．pH：pH6.0～8.0;三、血清学技术的优越性

(一)检样量少，预处理简单：

一滴血清/血、一根羽毛、少许组织悬液、植物一片子叶等。

(二)种类多，可择优选用

(三)方法简便快速

(四)特异性、敏感性

(五)Ag/Ab定位、定量;四、血清学试验的制定原则

特定的或建立新的血清学方法时，应注意以下原则：

(一)Ag准备和提纯

1．购自试剂公司：如半Ag、激素、酶、

农药、抗生素、昂贵的天然Ag等。;(二)Ab制备提纯;(七)敏感性试验

(八)重复性试验

(九)稳定性试验;五、血清学试验的应用

(一)血清学诊断

(二)生物活性物质超微定量

(三)Ag/Ab亚细胞、细胞水平定位

(四)Ag组分分析，如病毒结构蛋白可用免疫转印，免疫沉淀(琼扩、电泳、交叉免疫电泳等)

(五)物种鉴定分型

(六)有机物提取纯化;六、血清学试验的类型

（一）沉淀反应：

环状沉淀试验

琼脂扩散：

免疫电泳

对流电泳

火箭电泳

双向电泳;补体结合试验;（二）凝集反应：

直接凝集：平板、试管

间接凝集：间接血凝、炭凝、乳胶凝集

协同凝集：

凝集抑制：（血凝抑制）

（三）与补体有关的实验：活性、组分、补结、免疫粘附血凝等。

（四）中和试验;（五）标记技术：

同位素标记

荧光标记：化学发光免疫技术

酶标记：组化法、测定法（ELISA）

ELISA：间接法、免疫酶斑点技术（dot-

ELISA）、竞争法、夹心法、

桥联法

（六）免疫电镜组化技术

胶体金铁蛋白标记技术;;0ng/ml，检测线为清晰红色条带；

1ng/ml，检测线与0标准品的相似;

3ng/ml，检测线浅于0ng/ml标准品;

10ng/ml，检测线明显浅于0;

肉眼判定检测限可达3ng/ml。;第二节细胞免疫技术