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第2章细胞工程第2节动物细胞工程2.2.1动物细胞培养
21、动物细胞培养(基础)2、动物细胞融合与单克隆抗体3、动物细胞核移植技术与克隆动物细胞工程是指应用细胞生物学、分子生物学和发育生物学等多学科的原理和方法,通过细胞器、细胞或组织水平上的操作,有目的地获得特定的细胞、组织、器官、个体或其产品的一门综合性的生物工程。细胞工程植物细胞工程植物组织培养植物体细胞杂交再谈细胞工程动物细胞工程的基本技术(基础)
皮肤的自体移植小面积烧伤:植皮(自身)后恢复1)使用他人皮肤?患者自身的不够用,如何解决?大面积烧伤?2)培养自身细胞?从社会中来
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1、概念:从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术。2、目的:获得细胞或细胞产物;不能获得完整动物个体。3、原理:细胞增殖(有丝分裂)那么,动物细胞的培养需要哪些条件呢?动物细胞培养动物体组织单个细胞细胞生长和增殖取出分散适宜条件
601动物细胞培养的条件糖类、氨基酸、无机盐、维生素…无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境充足的营养、稳定的内环境将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基含人类未知、细胞生长增殖所必需的物质,满足细胞对未知营养成分的需求。培养基的构成:合成培养基+血清等天然成分一般用液体培养基,也称为培养液
701动物细胞培养的条件糖类、氨基酸、无机盐、维生素…无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境①培养液、培养用具:灭菌处理;②无菌操作;③适量添加抗生素定期更换培养液,以便清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。①适宜的温度:哺乳动物细胞培养的温度多以___________为宜;②适宜的pH:多数动物细胞生存的适宜pH为________;③适宜的渗透压:维持细胞正常的形态和功能。36.5±0.5℃7.2-7.4
801动物细胞培养的条件糖类、氨基酸、无机盐、维生素…无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境维持培养液的pH95%空气+5%CO2的CO2培养箱O2:细胞代谢所必需CO2培养箱松盖培养瓶培养皿你还记得体液调节中的CO2的作用吗?
动物组织分散成单个细胞二.动物细胞培养的过程培养根据动物细胞培养的概念,初步构建动物细胞培养的流程:(1)培养前,为什么要将动物组织分散成单个细胞?(2)怎样将动物组织分散成单个细胞?(3)分散成的单个细胞,如何培养?(4)培养一段时间后,细胞分裂会受阻,为什么?怎么解决?(5)什么是原代培养和传代培养?(6)进行传代培养(分瓶培养)时,如何处理?
取动物组织制成细胞悬液转入培养液进行原代培养放入CO2培养箱中培养传代培养放入CO2培养箱中培养用机械的方法,或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理的方法,将组织分散成单个细胞02动物细胞培养的过程2.培养过程:
动物组织分散成单个细胞二.动物细胞培养的过程培养根据动物细胞培养的概念,初步构建动物细胞培养的流程:(1)培养前,为什么要将动物组织分散成单个细胞?①分散不会限制彼此的生长和增殖;②分散有利于与培养液充分接触,保证O2与营养供应和代谢物及时排出。
动物组织分散成单个细胞二.动物细胞培养的过程培养根据动物细胞培养的概念,初步构建动物细胞培养的流程:(2)怎样将动物组织分散成单个细胞?机械的方法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间。①说明动物细胞间的物质主要是什么成分?蛋白质机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理
动物组织分散成单个细胞二.动物细胞培养的过程培养根据动物细胞培养的概念,初步构建动物细胞培养的流程:阅读教材P44“动物细胞培养的过程”,思考、回答下列问题:(2)怎样将动物组织分散成单个细胞?机械的方法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间。②用胃蛋白酶可以吗?不可以,多数动物细胞生存的适宜pH为7.2~7.4,而胃蛋白酶的适宜pH约为2,在此环境中会失活。机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理
动物组织分散成单个细胞二.动物细胞培养的过程培养根据动物细胞培养的概念,初步构建动物细胞培养的流程:阅读教材P44“动物细胞培养的过程”,思考、回答下列问题:(2)怎样将动物组织分散成单个细胞?机械的方法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间。③胰蛋白酶处理时间过长,会怎样?会破坏细胞结构,把细胞消化掉机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理
动物组织分散成单个细胞二.动物细胞培养的过程培养根据动物细胞培养的概念,初步构建动物细胞培养的流程:(3)分散成的单个细胞,如何培养?用培养液将细胞制成细胞悬液,放入培养皿或培养瓶内,置于适宜环境中培养。机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理加培养液细胞
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